MiR-26b靶向ROCK1调控间充质干细胞迁移的机制研究

发布时间：2020-12-13 02:42

　　间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）是一种多能干细胞,因其来源广泛,自我更新、增殖能力和多向分化潜能强,并且具备免疫调节、抗炎和神经保护作用,从而成为临床细胞治疗中理想的种子细胞。移植的MSCs需定向迁移到损伤部位才能更好地发挥疗效,但有研究表明只有极少部分移植的MSCs可以到达病变部位,修复和治疗效果非常有限。因此,研究MSCs的迁移机制、提高其迁移能力对于提高MSCs的有效利用率至关重要。本文在实验室前期工作基础上,研究miR-26b靶向Rho相关丝氨酸/苏氨酸激酶（Rho-associated kinase 1,ROCK1）促进MSCs迁移的机制。本研究发现,在MSCs中转染miR-26b mimic上调miR-26b的表达能够显著降低ROCK1 m RNA水平的表达,而转染miR-26b Inhibitor（miR-26b I）抑制miR-26b后能够显著上调ROCK1 m RNA水平的表达;Western blot检测发现,高表达miR-26b后显著降低ROCK1蛋白水平的表达,而抑制miR-26b则显著提高ROCK1蛋白水平的表达,表明mi... 

【文章来源】：苏州大学江苏省

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
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序言
材料和方法
    一、材料
        1.实验动物
        2.主要仪器设备
        3.主要试剂
        4.试剂配制
    二、实验方法
        1.MSCs的分离培养
        2.Trizol法提取总RNA、反转录成cDNA和实时定量PCR
        3.Boyden chamber实验
        4.细胞转染
        5.腺病毒的包装和扩增
        6.免疫印迹（Western blot）
        7.细胞免疫荧光染色
        8.大鼠ROCK1的3’UTR双荧光素酶报告基因系统荧光活性检测
        9.真核表达质粒的构建
        10.统计分析
实验结果
    一、在MSCs中miR-26b可直接靶向ROCK1
        1.miR-26b能够下调MSCs中ROCK1的表达
        2.ROCK1 3’UTR区双荧光素酶报告基因载体的构建
        3.ROCK1是miR-26b的直接靶基因
    二、ROCK1参与miR-26b调控的MSCs迁移
        1.抑制ROCK1的活性能够回复miR-26b Inhibitor对MSCs迁移的抑制作用
        2.高表达ROCK1减弱miR-26b对MSCs迁移的促进作用
    三、miR-26b靶向ROCK1影响Akt信号通路和ROCK1下游分子
        1.miR-26b对Akt信号通路和ROCK1下游分子的影响
        2.同时改变ROCK1和miR-26b对Akt信号通路和ROCK1下游分子的影响
    四、miR-26b对MSCs铺展面积、极性以及MLC分布的影响
        1.ROCK1参与调控miR-26b对MSCs面积、周长和极性的影响
        2.高表达miR-26b后磷酸化肌球蛋白轻链在MSCs中分布的变化
讨论
参考文献
结论
综述
    参考文献
硕士期间已发表及待发表的论文
本研究所获基金资助
缩略词表
致谢



本文编号：2913740