miRNA-194-5p通过Stra8基因调控精子发生的初步研究

发布时间：2020-12-13 09:07

　　目的:本研究旨在探索miRNA-194-5p能否通过Stra8来调控精子发生。通过对出生后第11天的Stra8基因敲除（Stra8-/-）及野生型雄性小鼠睾丸组织进行RNA测序分析,筛选Stra8缺失时差异表达的miRNAs。验证其中差异表达的miRNAs与Stra8之间的关系,并进一步探索miRNA-194-5p是如何通过Stra8来影响精原细胞增殖分化过程的。方法:1、饲养并收集不同周龄的野生型和Stra8-/-小鼠,用HE染色法分析其睾丸组织结构。选取出生后11天的野生型及Stra8-/-小鼠睾丸进行RNA-seq检测,筛选出差异表达的miRNAs。应用实时定量PCR法验证miRNAs在两种小鼠睾丸组织中的表达水平,并检测它们在小鼠不同组织中的表达情况。2、构建 pGL3-Basic-Stra8 3’UTR 重组质粒及 pMSCV-PIG-miR-194-5p/miR-205-3p/miR-3544-3p重组质粒。利用双荧光素酶报告基因实验探索它们之间有无转录调控关系。应用TargetScan数据库分析miR-194-5p与Stra8之间的结合位点,并突变其结合位点,再次应用双荧... 

【文章来源】：扬州大学江苏省

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１．２不同周龄小鼠睾丸ＨＥ染色结果图??

ｉＲ－１９４－５ｐ?１．６６?１１．１９?２．７５２９５４８９??ｉＲ－２０５－３ｐ?０．２２?１３．１６?５．６３５５３０５７??ｉＲ－３３７－３ｐ?１１．７８?１７６．３５３３３３?４．２１７７８９７９３??ｉＲ－３０ｃ－ｌ－３ｐ?４０８．５５?３６３７．１７３３３３?２．８７４７５１３９??ｉＲ－３５４４－３ｐ?２０１．７６?１１．８?－４．０９９３２８１３１??ｉＲ－ｌａ－３ｐ?２３１２．８４?９６．７８５?－４．５８７８４６８２１ｑＲＴ－ＰＣＲ验证差异表达的ｍｉＲＮＡｓ??于实验室前期工作发现在出生后第１１天Ｓｔｒａ８野生型及纯合子小鼠睾丸中生精明显统计学差异，但其数量上己有变化，而在出生后第１０天两种类型的小鼠管内生精细胞数几乎相等，于是我们后期的验证选择了出生后第１０天小鼠睾果发现?ｍｉＲ－１９４－５ｐ、ｍｉＲ－２０５－３ｐ、ｍｉＲ－３５４４－３ｐ、ｍｉＲ－ｌａ－３ｐ、ｍｉＲ－３３７－３ｐ?在出的小鼠睾丸内的表达趋势与ＲＮＡ－ｓｅｑ结果一致（如图２．２．１所示）。而ｍｉＲ－３达趋势与ＲＮＡ－ｓｅｑ趋势相反。??

?夏静?ｍｉＲＮＡ－１９４－５ｐ通过Ｓｔｒａ８调控精子发生的初步研究?３９??组织中的表达均较高；ｍｉＲ－３５４４－３ｐ在睾丸中的表达最高，在肝脏及卵巢中的表达较高，??而在心脏、脑、脾、肺、肾、肌肉、小肠中表达极低。ｍｉＲ－ｌａ－３ｐ在睾丸、肌肉、小肠中??的表达较高，在心脏、肝脏、肾脏中的表达中等，在脑、脾、肺、卵巢组织中表达低，??ｍｉＲ－３３７－３ｐ在各组织中的表达均较高。??ｕ?ｍｉＲ１９４－５ｐ?ｍｔｃｕｍｉｒ１ａ－３ｐ?ｉｎ?ｍｔｃ〇ｍｉｒ３５４４－３ｉｎ?ｍｔｃ??

【参考文献】：
硕士论文
[1]Stra8在精子发生中作用机制的初步研究[D]. 马海涛.扬州大学 2017



本文编号：2914296