泛福舒通过TLR4和TLR2介导的ERK1/2/NF-κB通路上调RAW264.7细胞炎症因子的表达

发布时间：2020-12-22 03:38

　　目的泛福舒（OM85-BV）是一种含8种常见呼吸道病原菌的冻干溶解物,通过调节巨噬细胞的活性和细胞因子的产生,在抗感染免疫中发挥重要作用。本研究主要探讨泛福舒对小鼠RAW264.7巨噬细胞炎症因子的调节作用及相关机制研究。方法体外培养小鼠RAW264.7巨噬细胞,（1）泛福舒分别以不同的时间点及不同的浓度梯度刺激RAW264.7细胞,用RT-PCR和ELISA分别检测IL-1β, IL-6和TNF-α mRNA和蛋白的表达；细胞免疫荧光检测（?）RAW264.7细胞表面TLR4和TLR2表达情况；用小分子siRNA干扰技术分别沉默TLR4, TLR2, MyD88和TRAM基因的表达,RT-PCR和ELISA分别检测IL-1β, IL-6, TNF-α mRNA及蛋白的表达变化；（2）泛福舒以不同时间点刺激RAW264.7细胞,Western Blot检测AKT, ERK1/2, P38的磷酸化水平；用（?）AKT, ERK1/2, P38特异性抑制剂Ly294002, U0126和SB203580分别刺激RAW264.7细胞,RT-PCR和ELISA分别检测IL-1β, IL-6, ... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：129 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

泛福舒以时间依赖的方式诱导Raw264.7细胞分泌IL-lp，IL-6和TNF-aA. IL-lp,IL-6和TNF-amRNA表达水平（注：与Oh组相比，><0.05)

华中科技大学博士学位论文浓度起逐渐升高，与(Hig/ml组相比差异具有统计学意义（><0.05,见图2B)。A B12 ^ 12 0押 ml Opg ml^ [ I 25Mg m) * E I I 25明 ml ★■y 10 50冲 ml T \ 10 — 50ng ml T^ 7777X 100^ ml Jni 5{‘ VTTTX lOOMgml ^E o i ^0. 1！ i 1 ii■ 6 . || 5 6 . ||i i - i k Fill4 J ni "4- J J nilIL-lp IL-6 TNF-a IL-lp IL-6 TNF-a图2泛福舒以浓度依赖的方式诱导RAW264.7细胞分泌IL-lp, IL-6和TNF-aA. IL-lp, IL-6和TNF-a mRNA表达水平（注：与0^ig/ml组相比，><0.05)B. IL-ip, IL-6和TNF-a分泌水平（注：与0呢/ml组相比，><0.05)2. TLR2/TLR4通路参与泛福舒诱导IL-ip, IL-6和TNF-a的产生(1) TLR2和TLR4在RAW264.7细胞中的表达细胞免疫焚光示TLR2和TLR4表达于RAW264.7细胞膜表面，见图3。28

图 7. MyD88、TRAM-siRNA 干扰效率A. MyD88-siRNA 干扰效率（Western Blot 和 RT-PCR)B. TRAM-siRNA 干扰效率（Western Blot 和 RT-PCR)


本文编号：2931066