脑皮层的不同类型的神经元对神经活性依赖性基因调控反应差异性的研究

发布时间：2021-01-02 04:22

　　背景:新皮质投射神经元细胞主要有两种类型,一种是皮质内连接新皮层上层（UL:II-IV）的神经细胞,还有一种是皮质下连接新皮层下层（LL:V-VI）的神经细胞。在出生后发育期间,丘脑的传人活动可以调节脑中层特异性基因的表达从而控制新皮层神经细胞形成不同的细胞结构,这对新皮层的发育是至关重要的。大脑新皮层中可以表达很多层特异性基因,这些基因的表达很多都受到神经活性的影响,活动依赖性基因调节对神经元的适应性行为以及经验依赖的可塑性发育都是非常重要的。目的:本文主要研究1、在缺少内在丘脑传入活动的情况下,层特异性基因的表达情况2、在外部感知活动缺失的情况下,层特异性基因的表达情况3、活性依赖性基因调节差异性的内在分子机制方法:1、通过基因敲除实验,特异性敲除突触前胞内蛋白munc18,产生缺乏丘脑传入活动的基因敲除小鼠,检测层特异性基因的表达情况2、小鼠出生后,通过移除小鼠两侧眼球使小鼠在发育时视觉皮层缺乏外周传入活动的刺激,然后检测P19天时层特异性转录因子的表达水平3、我们从P0天的小鼠脑组织中提取原代神经细胞进行体外培养,培养7天后,在培养基中提高钾离子浓度到10mM来模拟神经细胞极度... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

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英文摘要
1.引言
2.材料
    2.1 细胞系及动物模型
    2.2 仪器与设备
    2.3 主要试剂及耗材
    2.4 试剂盒
    2.5 抗体
    2.6 试剂的配置及使用
    2.7 数据处理及制图
3.实验方法
    3.1 细胞实验
        3.1.1 Neuro2a细胞培养
        3.1.2 荧光素酶实验
        3.1.3 转染
        3.1.4 ICR小鼠脑皮层原代神经细胞的分离与培养
        3.1.5 高钾实验
        3.1.6 细胞免疫荧光
    3.2 动物实验
        3.2.1 小鼠去除眼球实验
        3.2.2 组织免疫荧光
        3.2.3 染色质免疫沉淀技术
        3.2.4 实时荧光定量PCR
        3.2.5 表观遗传学分析
        3.2.6 蛋白质免疫印迹
4.实验设计与数据分析
5 实验结果
    5.1 ThMunc18KO小鼠脑皮层上层基因表达降低,下层基因的表达未受到影响
    5.2 ThMunc18KO小鼠中,EGR1和c-FOS在整个新皮层中的表达量均有所降低
    5.3 在视觉剥夺的青春期小鼠中,UL和LL基因表达都是正常的
    5.4 在体外实验中,UL和LL基因表达量都受神经活性的影响
    5.5 EGR1和c-FOS可以结合到新皮层特异性基因的启动子上
    5.6 UL和LL神经元之间不同的染色状态
6 讨论
7 结论
参考文献
个人简历
致谢
综述
    参考文献



本文编号：2952640