TRIM21对脑心肌炎病毒的增殖调控作用研究

发布时间：2021-01-02 06:50

　　TRIM21是三基序蛋白家族的成员之一,与多种病毒的复制增殖相关,但其与EMCV感染的研究机制尚不明确。该研究采用脂质体介导法将构建成功的TRIM21的真核表达质粒pcDNA3.1-TRIM21以及针对该靶点的小RNA干扰序列瞬时转染至HEK293和HeLa细胞,探讨细胞内TRIM21的表达对脑心肌炎病毒复制增殖的影响,并进一步进行机制研究。结果显示, TRIM21在细胞中成功过表达; EMCV感染24 h后进行检测,结果证明,过表达TRIM21组病毒滴度、病毒拷贝数及病毒蛋白均低于对照组。RNA干扰实验下调TRIM21后,病毒滴度、病毒拷贝数及病毒蛋白显著高于对照组。此外,机制研究提示, TRIM21可正调节II型干扰素及促炎性因子IL-6的转录,从而抑制EMCV的增殖。以上结果表明, TRIM21与EMCV的复制增殖密切相关,可能通过对IFN信号通路部分蛋白及促炎性因子的调控参与对病毒复制增殖的影响。 

【文章来源】：中国细胞生物学学报. 2019年12期

【文章页数】：9 页

【部分图文】：

TRIM21下调对EMCV感染的影响

将外源基因转染HEK293细胞后提取RNA进行基因水平的检测。图3A显示,转染组TRIM21基因表达较空载组显著提高(P<0.001),提示外源TRIM21在基因水平成功表达。Western blot检测结果显示,与空载组相比,TRIM21的表达量随着TRIM21浓度的增加而增加,呈剂量依赖性关系(图3B),TRIM21瞬时过表达成功。图2 TRIM21基因的扩增及双酶切验证

图1 EMCV感染细胞后TRIM21的表达量检测瞬时过表达TRIM21后进行EMCV感染实验,接毒量为0.01 MOI。接毒后收集上清和细胞,检测细胞胞内和胞外的病毒滴度。结果显示,随着TRIM21浓度的增加,细胞内和细胞外病毒滴度也逐渐减少,当TRIM21浓度为1.5μg时,病毒滴度显著下降(图3C和图3D,P<0.05)。后期,本实验尝试用较高浓度的TRIM21质粒转染细胞,发现当浓度高于1.5μg时对细胞活力产生了影响(结果未显示)。为了验证TRIM21在不同细胞中是否有相同的作用,在HeLa细胞中做了同样的实验。在基因(图3E)和蛋白(图3F)水平检测TRIM21过表达后,EMCV VP1蛋白和EMCV 3D(图3G)的表达被明显抑制。这一结果提示,TRIM21的表达量与EMCV增殖呈负相关。

【参考文献】：
期刊论文
[1]猪脑心肌炎病毒NJ08株基因组序列测定与分析[J]. 白娟,蒋康富,李玉峰,王先炜,姜平.  中国预防兽医学报. 2011(05)

博士论文
[1]E3泛素连接酶TRIM4和TRIM21调节细胞抗病毒天然免疫信号转导的机制[D]. 燕杰.武汉大学 2012
[2]人IFN-γ在表达HBsAg肝细胞中的特异性表达及其体外抑制乙肝病毒的作用[D]. 李朵璐.郑州大学 2010

硕士论文
[1]金荞麦对克雷伯杆菌肺炎大鼠的保护作用及其机制[D]. 汪春彦.安徽医科大学 2011



本文编号：2952872