肠道病毒D组68型假病毒的构建

发布时间：2021-01-13 12:01

　　目的制备携带萤火虫荧光素酶报告基因的肠道病毒D组68型（enterovirus D68,EV-D68）假病毒。方法分别构建携带绿色荧光蛋白报告基因的EV-D68表达子和携带萤光虫荧光素酶报告基因的EV-D68复制子,共转染HEK-293T细胞后收获EV-D68假病毒;实时逆转录聚合酶链反应（reverse transcription PCR,RT-PCR）及蛋白质印迹法（Western blotting）鉴定EV-D68假病毒;实时荧光定量PCR检测假病毒滴度,荧光强度定量检测假病毒感染活性。结果成功构建EV-D68表达子和复制子;成功制备EV-D68假病毒,RT-PCR和Western blotting结果表明其具有萤火虫荧光素酶报告基因和与活病毒相同的衣壳蛋白,拷贝数为（4～8）×106copies/m L,荧光强度与假病毒感染剂量呈正相关,证明其具有感染活性。结论成功构建了EV-D68假病毒。 

【文章来源】：微生物学免疫学进展. 2019,47(06)

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

肠道病毒结构以及EV-D68假病毒构建原理示意图[1]

酶切条带大小与预期相符。最后测序的结果显示，对应匹配率100%，见图2。将构建的EV-D68衣壳蛋白表达子转染细胞，由于载体构建时EGFP位于P1之前，因此EGFP表达强度可以衡量P1表达情况。转染后EGFP的表达效率超过80%，表明该质粒可正常表达，见图3。

将构建的EV-D68衣壳蛋白表达子转染细胞，由于载体构建时EGFP位于P1之前，因此EGFP表达强度可以衡量P1表达情况。转染后EGFP的表达效率超过80%，表明该质粒可正常表达，见图3。2.2 假病毒复制子的构建和鉴定

【参考文献】：
期刊论文
[1]手足口病假病毒中和抗体检测平台的建立和初步应用[J]. 吴星,董方玉,苏瑶,陈盼,梁争论.  中国病毒病杂志. 2018(06)
[2]柯萨奇病毒A组6型报告基因假病毒可视化感染模型的建立[J]. 吴星,苏瑶,董方玉,陈盼,李克雷,高帆,卞莲莲,孙世洋,胡亚林,毛群颖,梁争论.  中国病毒病杂志. 2018(06)
[3]柯萨奇病毒A组16型中和抗体假病毒荧光定量检测方法的建立及初步应用[J]. 郝晓甜,陈盼,毛群颖,邵杰,林惠娟,罗震,吴星,梁争论.  中国病毒病杂志. 2016(01)



本文编号：2974837