基于多重PCR-质谱的冠状病毒高通量检测方法的建立与应用

发布时间：2021-01-20 10:13

　　冠状病毒（CoVs）属于冠状病毒科,是自然界广泛存在能够感染人和动物的一大类病毒家族。基于系统发育树分析,国际病毒分类学会（International committee on taxonomy of viruses,ICTV）将 CoVs 分为 alpha-CoV（α 属）,beta-CoV（β 属）,gamma-CoV（γ属）和delta-CoV（δ属）。目前已知的六种人冠状病毒（HCoV）:HCoV-229E、HCoV-OC43、SARS-CoV、HCoV-NL63、HCoV-HKUl 和 MERS-CoV 均属于α属和β属。人冠状病毒通常引起轻微的上呼吸道感染症状,而2003中国暴发的SARS-CoV引起的严重急性呼吸综合征（SARS）和2012年中东地区流行的MERS-CoV引起中东呼吸综合征（MERS）,分别造成高达10%和40%的死亡率。SARS和MERS的暴发,表明高致病性的人冠状病毒严重地威胁着人类的生命健康,因此建立快速、灵敏的检测方法对于及时实施有效的预防控制措施、阻止疾病的进一步传.播至关重要。一方面,大量来自全球各地的朝圣者和游客前往中东地区,增加了 MERS... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：83 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
引言
实验材料
    1.1 实验载体和菌株
    1.2 实验试剂和耗材
    1.3 实验仪器
    1.4 试剂配制
        1.4.1 LB培养基配制
        1.4.2 琼脂糖凝胶配置
        1.4.3 其他溶液的配制
    1.5 软件
        1.5.1 序列比对和拼接
        1.5.2 扩增引物和延伸探针的设计和评价
        1.5.3 数据收集和分析
实验方法
    2.1 冠状病毒特异性和保守序列的分析与筛选
    2.2 引物探针的设计、配制与测试
    2.3 质粒构建和标准品制备
    2.4 样本采集
    2.5 样本总RNA的提取和逆转录
    2.6 冠状病毒多重PCR-质谱检测方法实验过程
        2.6.1 多重PCR扩增反应
        2.6.2 SAP酶消化反应
        2.6.3 单碱基延伸反应
        2.6.4 样本的树脂纯化
        2.6.5 MALDI-TOF质谱检测
    2.7 冠状病毒多重PCR-质谱检测方法的应用
    2.8 统计学分析
实验结果
    3.1 冠状病毒多重PCR-质谱检测（mCoV-MS）方法的建立
        3.1.1 冠状病毒多重PCR-质谱检测方法灵敏度分析
        3.1.2 冠状病毒多重PCR-质谱检测方法特异性分析
        3.1.3 冠状病毒多重PCR-质谱检测方法重复性分析
    3.2 蝙蝠和啮齿类动物样本冠状病毒多重PCR-质谱检测结果
    3.3 临床样本冠状病毒多重PCR-质谱检测结果
小结
讨论
文献综述
    1 HCoV的致病性及流行情况
        HCoV-229E（α属）
        HCoV-OC43（β属A谱系）
        SARS-CoV（β属B谱系）
        HCoV-NL63 （α属）
        HCoV-HKU1（β属A谱系）
        MERS-CoV（β属C谱系）
    2 HCoV的发育进化及变异重组
    3 HCoV的检测诊断及预防治疗
        HCoV分离培养
        HCoV血清学试验
        HCoV分子检测
        HCoV预防治疗
参考文献
在学期间发表的学术论文
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]The prevalence, origin, and prevention of six human coronaviruses[J]. Lanlan Liu,Tao Wang,Jiahai Lu.  Virologica Sinica. 2016(01)



本文编号：2988858