以β-葡聚糖为佐剂的脑膜炎多糖结合疫苗制备及其免疫原性研究

发布时间：2017-04-11 16:01

  本文关键词：以β-葡聚糖为佐剂的脑膜炎多糖结合疫苗制备及其免疫原性研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：流行性脑脊髓膜炎是由脑膜炎奈瑟氏球菌引起的化脓性脑膜炎,此病分布范围广,致死率高,具有耐药性。但是单纯的脑膜炎双球菌荚膜多糖(简称CPS)属胸腺非依赖性抗原不能诱导免疫记忆,且只适用于成人,不适合常规接种两岁以下儿童。将载体蛋白与CPS共价结合可使其转化成T细胞依赖性抗原,从而刺激合成T细胞依赖性抗体,不仅可以产生免疫记忆,还能提高免疫球蛋白Ig G的抗体比例及抗体亲和力的成熟,这种多糖结合疫苗可适用于成人,也适用于婴幼儿。。然而,目前这些结合疫苗均存在接种剂量较大、免疫效率不高的缺点,因此,亟待研发效率更高和免疫原性更强的新型结合疫苗。尽管?-葡聚糖佐剂已经被用来提高抗原的免疫原性,但是将佐剂与结合疫苗化学偶联或物理混合的研究几乎没有被研究。?-葡聚糖可以促进细胞免疫和体液免疫,通过与特殊受体如CR3和Dectin-1等结合,可以激活巨噬细胞,影响细胞因子的释放。本次研究中,活化的CPS与破伤风类毒素(TT)化学偶联成CPS-TT,?-葡聚糖与高碘酸钠氧化羟基被氧化成醛基,再将?-葡聚糖偶联CPS-TT生成CPS-TT-G。将?-葡聚糖与CPS-TT物理混合得到CPS-TT/G1和CPS-TT/G2。使用红外色谱,核磁共振,动态光散射仪,高效液相色谱分析等对产物进行结构分析。将CPS,CPS-TT,CPS-TT/Al,CPS-TT-G,CPS-TT/G1和CPS-TT/G2免疫小鼠后运用ELISA方法测定小鼠血清中的抗体滴度,研究发现CPS产生的CPS特异性的Ig M抗体滴度远远低于CPS-TT和CPS-TT-G的抗体滴度,这表明将TT偶联到CPS上可大大增加CPS特异性的Ig M抗体滴度,同时注射第三针CPS-TT-G产生的CPS特异性Ig G/Ig M比率远远高于CPS-TT。这说明加入?-葡聚糖使抗体的合成更多地从Ig M转为合成Ig G。将CPS-TT-G免疫小鼠21d后得到的CPS特异性Ig G抗体滴度是CPS-TT的8.2倍。这可能是将?-葡聚糖与CPS-TT化学偶联可保证二者同时到达抗原递呈细胞。然而,将?-葡聚糖与CPS-TT物理混合后,CPS特异性Ig G抗体滴度降低了,这可能是因为将?-葡聚糖与CPS-TT物理混合后,?-葡聚糖会优先到达抗原递呈细胞,占据B细胞结合位点。这充分说明,将?-葡聚糖化学偶联是提高结合疫苗CPS特异性抗体滴度的一种很好的策略。
【关键词】：脑膜炎球菌荚膜多糖 佐剂 β-葡聚糖 免疫原性
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R392-33
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 第1章 绪论12-24
• 1.1 生物制品12-13
• 1.1.1 生物制品的定义12
• 1.1.2 从疫苗生产看生物制品的发展概况12-13
• 1.2 脑膜炎双球菌疫苗13-16
• 1.2.1 流行性脑脊髓膜炎介绍13-14
• 1.2.2 流行性脑膜炎致病因素及分布14-15
• 1.2.3 脑脊髓球菌荚膜多糖疫苗发展现状15-16
• 1.3 脑膜炎球菌疫苗的 β-葡聚糖修饰16-19
• 1.3.1 β-葡聚糖的基本结构17
• 1.3.2 β-葡聚糖的高级结构17-18
• 1.3.3 β-葡聚糖的免疫调节作用18-19
• 1.3.4 β-葡聚糖的免疫调节作用机制19
• 1.4 β-葡聚糖修饰产物的分离纯化技术19-20
• 1.5 β-葡聚糖修饰产物的常用表征方法20-22
• 1.5.1 电泳法20
• 1.5.2 圆二色光谱（CD）和荧光光谱分析20-21
• 1.5.3 核磁共振波谱法(NMR)21
• 1.5.4 傅里叶变换红外光谱法。21
• 1.5.5 高效液相色谱法（HPLC）21
• 1.5.6 动态光散射（DLS）21-22
• 1.6 佐剂修饰产物的免疫原性22
• 1.6.1 酶联免疫吸附法（简称ELISA）的原理22
• 1.6.2 酶联免疫吸附法的种类22
• 1.7 论文的立题思想22-24
• 第2章 β-葡聚糖修饰脑膜炎多糖结合疫苗的研究24-40
• 2.1 引言24
• 2.2 试剂与仪器24-26
• 2.3 实验方法26-27
• 2.3.1 脑膜炎球菌荚膜多糖（简称CPS）活化26
• 2.3.2 CPS-TT的制备与纯化26
• 2.3.3 葡聚糖（简称Glu）的氧化26
• 2.3.4 CPS-TT-G的制备与纯化26-27
• 2.4 结构分析和含量测定方法27-33
• 2.4.1 SDS-PAGE电泳分析27-30
• 2.4.2 蛋白浓度测定30-31
• 2.4.3 结合物中结合和游离Y糖含量测定31-32
• 2.4.4 动态光散射32
• 2.4.5 尺寸排阻色谱分析32-33
• 2.4.6 ~1H核磁共振33
• 2.4.7 红外光谱分析33
• 2.5 实验结果及讨论33-38
• 2.5.1 修饰产物的电泳分析33-34
• 2.5.2 修饰产物的SEC分析和定量分析34-36
• 2.5.3 修饰产物的结构表征36-38
• 2.6 本章小结38-40
• 第3章 修饰产物免疫原性的研究40-53
• 3.1 修饰产物的动物免疫40
• 3.2 动物血清的抗体滴度测定40-42
• 3.2.1 ELISA法包被底物的配制40-41
• 3.2.2 ELISA法抗体滴度的测定过程41-42
• 3.3 抗体特异性的测定42
• 3.4 抗体亲和力的测定42
• 3.5 统计分析42-43
• 3.6 实验结果与讨论43-51
• 3.6.1 化学偶联与物理混合的特异性抗体43-49
• 3.6.2 竞争性ELISA研究49
• 3.6.3 抗体亲和力测试49-51
• 3.7 本章小结51-53
• 第4章 结论53-55
• 参考文献55-62
• 作者攻读学位期间的科研成果62-63
• 致谢63

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