布鲁氏菌BMEII0988基因的克

发布时间：2021-01-23 09:11

　　[目的]检测布鲁氏菌BMEII0988基因的原核表达情况并对其免疫原性进行分析。[方法]以热灭活的布鲁氏菌16M标准株为模板,根据Gen Bank中公布的羊种布鲁氏菌16M的BMEII0988基因序列分别设计引物,用PCR方法扩增BMEII0988基因的编码序列,连接到T载体测序,将测序正确的基因序列克隆到原核表达载体p ET-32a上,转化入大肠杆菌DE3感受态细胞中诱导表达,将获得的目标蛋白用AKTAxpress智能多维纯化系统进行纯化,并用Western Blot分析其反应原性。[结果]BMEII0988基因长度为1 131 bp,编码377个氨基酸,SDS-PAGE表明BMEII 0988融合蛋白在大约66 k Da处出现条带,纯化后条带单一,BMEII 0988蛋白（NCBI标准序列号:WP₀02966326.1）具有较好的反应原性。[结论]该研究为下一步建立相应蛋白标记的诊断方法和疫苗的研发奠定了基础。 

【文章来源】：生物技术. 2017,27(02)北大核心

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株与质粒
        1.1.2 试剂
        1.1.3 仪器
    1.2 方法
        1.2.1 BMEII0988基因的扩增
        1.2.2 重组质粒的酶切鉴定
        1.2.3 BMEII 0988蛋白的表达
        1.2.4 重组蛋白BMEII 0988的纯化及Western Blot分析
2 结果与分析
    2.1 目的基因的扩增
    2.2 重组表达质粒的构建及鉴定
    2.3 BMEII 0988蛋白的表达
    2.4 融合蛋白BMEII 0988的纯化及Western Blot分析
3 讨论
4 结论



本文编号：2994956