恶性疟原虫抗原PfMAg-1功能研究

发布时间：2021-01-26 13:44

　　恶性疟原虫PfMAg-1蛋白表达于恶性疟原虫裂殖子表面,该蛋白不存在于感染人类的其它4类疟原虫中。本实验室前期分别表达PfMAg-1对N、C和中段抗原蛋白后免疫新西兰兔,取抗血清进行体外培养条件下的疟原虫生长抑制实验,均证实抗PfMAg-1部分片段的特异性抗体对恶性疟原虫生长有抑制作用。为进一步观察PfMAg-1全蛋白的功能,本研究采用规律成簇间隔短回文重复及相关失活蛋白（Clustered regulatory interspaced short palindromic repeats/dead CRISPR-associated protein 9,CRISPR/dCas9）技术,构建恶性疟原虫PfMAg-1低表达及过表达质粒,转染恶性疟原虫后分别筛选出恶性疟原虫低表达株（MAg1-KD）虫株及过表达虫株（MAg1-OE）。经PCR、实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）实验检测PfMAg-1的表达水平。并在体外培养条件下观察MAg1-KD虫株与MAg1-OE虫株生长趋势及裂殖子入侵效率。研究结果表明,1)恶性疟原虫MAg1-KD虫株较对照虫株的体外生长率显著降低,进一步实验... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：94 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１?ＣＲ！ＳＰＲ／ｄＣａｓ９技术调控恶性疟原虫基因原理示意图［３０］??ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９介导的敲除技术已经在恶性疟原虫中得到很好的确立，但是在该??

图２条件性降解目的蛋白原理示意图［２６］??

特异条带在琼脂糖凝胶电泳１５００ｂｐ／１１４００ｂｐ位置，与理论长度一致，进一??步测序结果表明，ｓｇＲＮＡ连入载体正确位置，说明ＭＡｇｌ－ＫＤ质粒构建成??功（图３）。??１００００ｊ??３０００＾＾＾＾?／?參：爲??１５００Ｈ??１Ｑ〇〇ｉ—Ｍ?＇??ＳＯＤ??图３敲低质粒ＭＡｇｌ－ＫＤ双酶切鉴定??Ｍ?Ｔｈｅｒｍｏ?Ｆｉｓｈｅｒ?Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ?１?ＭＡｇｌ－ＫＤ?质粒双酶切??＊转染虫株和鉴定??利用ＰＣＲ检测转染虫株内的药物筛选基因ＢＳＤ，包括Ｃｏｎｔｒｏｌ－ＫＤ虫株与??ＭＡｇｌ－ＫＤ虫株。结果显示，在ＰＣＲ成功扩增到ＢＳＤ基因，其特异条带在琼脂糖??凝胶电泳３９９ｂｐ位置，与理论长度一致，进一步测序结果表明，序列与ＢＳＤ编码??序列完全相符，说明Ｃｏｎｔｒｏｌ－ＫＤ质粒和ＭＡｇｌ－ＫＤ质粒成功转入恶性疟原虫３Ｄ７??虫株内（图４Ａ）。为了检测；？＞叹－７基因ｍＲＮＡ表达是否受到调控，通过ｑＲＴ－ＰＣＲ??检测；＾ｆｌｇ－ｉ基因的转录水平。与Ｃｏｎｔｒｏｌ虫株相比，ＭＡｇｌ－ＫＤ虫株转录水平降低??了?６５．３２％，表达水平具有统计学差异

【参考文献】：
博士论文
[1]恶性疟原虫候选抗原PfMAg-1的免疫保护效果评价[D]. 高宇辉.中国协和医科大学 2007



本文编号：3001217