人尿源干细胞来源外泌体的提取及鉴定

发布时间：2021-01-27 02:28

　　目的:提取并鉴定人尿源干细胞来源的外泌体（h USCs-Exo）。方法:利用改良的尿液收集装置收集健康成年男性新鲜尿液,采用“一次离心法”从尿液中分离得到人尿源干细胞（h USCs）,对其进行培养,传代;通过CCK-8法绘制其生长曲线,流式细胞术鉴定其表面标记物,体外定向诱导其向成骨细胞、脂肪细胞分化,分别采用茜素红、Von Kossa和油红O染色进行鉴定;采用改良超高速离心法从h USCs培养上清中提取h USCs-Exo,透射电镜分析其形态、NTA法分析其大小及浓度,蛋白质免疫印迹法（WB）检测其特异性蛋白CD9、CD63和HSP70的表达。结果:h USCs培养3-5天后开始贴壁生长,细胞在原代时呈“铺路石”样,在第一代和第二代时呈“米粒”样,传至第三代后逐渐呈“纺锤形”或“梭形”;经CCK-8法测定h USCs呈现典型的“S”形生长曲线;流式细胞技术显示:h USCs阳性表达间充质干细胞特异的表面标志物CD44、CD73、CD90和CD105,不表达CD19、CD34、C D45CD11b和HLA-DR,表明h USCs符合间充质干细胞的特征;同时h USCs在体外经成骨、成脂... 

【文章来源】：遵义医科大学贵州省

【文章页数】：49 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

人尿源干细胞P0-P8细胞形态学变化（×100）

图2 hUSCs生长曲线Figure 2 Cell proliferation curve of hUSCs面标志物s具有代表性的几种表面分子对第3代hUSCs进行流式细表达的CD44、CD73、CD90和CD105在hUSCs同样表达表达的CD19、CD34 、CD45 、CD11b和HLA-DR在。该实验结果表明hUSCs表达国际上公认的MSCs表面

遵义医学院硕士学位论文 李超然20图3 流式细胞术检测第3 代人尿源干细胞的表面抗原Figure 3 Surface antigen expression of the 3rd generation of human urine-derived stem cells byflow cytometry图注：a为CD44、b为CD73、c为CD90、d为CD105；e为CD19、CD34、CD45、CD11b、HLA-DR

【参考文献】：
期刊论文
[1]尿源性干细胞外泌体对移动性牙根吸收修复的影响及其作用机制[J]. 顾磊,戴红卫,周雯雯,周建萍.  广西医学. 2020(22)



本文编号：3002258