人源化小鼠模型的建立及用该模型进行基因治疗研究的初步探索和白介素-35对诊断早发型新生儿脓毒血症的临床意义
发布时间：2021-01-27 22:20
第一部分人源化小鼠模型的建立及用该模型进行基因治疗研究的初步探索背景:人源化小鼠模型广泛用于人体生理病理机制研究、药物临床疗效的评估。经过近三十年的发展,人源化小鼠模型日益成熟。IL2rg和prkdc/rag基因突变的新型免疫缺陷老鼠缺乏T、B、NK细胞,是目前应用最多的人源化小鼠模型。基因治疗是原发性免疫缺陷病患儿无条件进行移植时的首选治疗,其临床应用前需要在体外和和人源化小鼠体内进行安全性和有效性的临床前评估。方法:收集幼年特发性关节炎患儿废弃骨髓标本,磁珠分选CD34+细胞。辐照8-9周龄NOD-Prkdcscid Il2rgnull（NPG）雌性小鼠,4小时后通过尾静脉移植入1-5×105个CD34+细胞进行人免疫系统重建。移植后4周开始尾静脉取血流式细胞术检测人CD45细胞植入情况,移植后12-14周处死小鼠,流式细胞术分析各免疫器官细胞亚群,组织切片观察脾脏、胸腺形态。利用GFP慢病毒转染CD34+细胞,完成转染后流式细胞术分析转染效率,集落形成试验,移植入NPG小鼠体内观察细胞分化。结果:磁珠分选CD34+...
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：79 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
骨髓CD34+细胞分选后细胞亚群分析
图 1.3 NPG 小鼠 CFigure 1.3 Percentage and subsets of h用骨髓来源的 CD34+干细胞移植老重建，占外周血白细胞的 2.81%±2.27%合率明显上升（17.95%±15.01%，n=9）之间，之后一直维持在这一水平，无明显分析外周血人 CD45+细胞组成，发现 CD（91.67%±8.36%，n=9）。CD3+T 细胞在n=9），最后逐渐下降至 0.58%±0.36%10.12%-29.75%，CD56+NK 细胞则在 3.112 周，各个免疫器官嵌合情况分析发现且骨髓脾脏均以 CD19+B 细胞为主，无
CD5IgM CD10CD20图 1.6 NPG 小鼠不同部位 CD19+B 细胞发育标志Figure 1.6 Developmental markers on human CD19+ cells.分析 CD19+细胞表面标志，发现外周以 CD19+CD5+B1 细胞为主，在不表达。而 B 细胞成熟标志 IgM、CD20 在外周血最高，骨髓最低，细志 CD10 在骨髓中高达 90%以上，在外周血和脾脏也高表达。这与上CD38hi未成熟 B 细胞在脾脏中有不寻常的累积相一致。小鼠脾脏前体 B 细胞的积累1.108.9
本文编号：3003835
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【部分图文】：
骨髓CD34+细胞分选后细胞亚群分析
图 1.3 NPG 小鼠 CFigure 1.3 Percentage and subsets of h用骨髓来源的 CD34+干细胞移植老重建，占外周血白细胞的 2.81%±2.27%合率明显上升（17.95%±15.01%，n=9）之间，之后一直维持在这一水平，无明显分析外周血人 CD45+细胞组成，发现 CD（91.67%±8.36%，n=9）。CD3+T 细胞在n=9），最后逐渐下降至 0.58%±0.36%10.12%-29.75%，CD56+NK 细胞则在 3.112 周，各个免疫器官嵌合情况分析发现且骨髓脾脏均以 CD19+B 细胞为主，无
CD5IgM CD10CD20图 1.6 NPG 小鼠不同部位 CD19+B 细胞发育标志Figure 1.6 Developmental markers on human CD19+ cells.分析 CD19+细胞表面标志，发现外周以 CD19+CD5+B1 细胞为主，在不表达。而 B 细胞成熟标志 IgM、CD20 在外周血最高，骨髓最低，细志 CD10 在骨髓中高达 90%以上，在外周血和脾脏也高表达。这与上CD38hi未成熟 B 细胞在脾脏中有不寻常的累积相一致。小鼠脾脏前体 B 细胞的积累1.108.9
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