MRTF-A调控miR-1273g-3p对Aβ 25-35 损伤的SH-SY5Y细胞自噬的影响及机制研究
发布时间：2021-01-29 11:39
目的:在Aβ25-35诱导人源性SH-SY5Y损伤细胞上,筛选能差异化表达并与MRTF-A相关的miRNA,探讨MRTF-A介导miRNA对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞自噬的影响及机制。方法:1.在Aβ25-35诱导SH-SY5Y损伤细胞模型中,用基因芯片筛选与MRTF-A调控相关的miRNA:建立细胞模型;细胞分组(control,Aβ25-35,MRTF-A,MRTF-A+Aβ25-35)。转染MRTF-A质粒48h后,给予40μmol/L Aβ25-35处理,24h后,用western blot方法检测MRTF-A的蛋白表达水平,并提取RNA。用Agilent RNA 6000 Nano/Pico Assay法检测各组RNA质量合格后,使用miRNA One Array芯片技术分析各组中发生显著差异变化的miRNA。得到各组显著变化的miRNA,再通过各组间相互比较得到MRTF-A调控的miRNA。筛选出差异性表达最为显著的miRNA,并用...
【文章来源】：武汉科技大学湖北省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
SH-SY5Y细胞模型的建立.转染MRTF-A质粒2.5μg至SH-SY5Y细胞中，48h后，给予40μmol/LAβ25-35处理24h（A）激光共聚焦检测MRTF-A质粒转染结果，绿色为GFP
武汉科技大学硕士学位论文表 1 各组总 RNA 质检结果Tab 1 Total RNA content in each group样本 A260/A280 A260/A230 RNA 总量 RIN 值vector 1.88 2.31 20.50 6.10Vector+ Aβ25-351.87 1.82 12.78 5.80MRTF-A+ Aβ25-351.93 1.45 6.38 6.10MRTF-A 1.86 2.32 24.54 5.70
图 3. miRNA 基因芯片结果分析.A：miRNA 基因芯片聚类分析图。聚类分析图中每一行为一张芯片，每一列为一个基因探针。图中 AM 指 MRTF-A+ Aβ25-35组，M 指 MRTF-A 组，C指 vector 阴性对照组，A 指 Aβ25-35组。红绿色阶标示了探针讯号上/下调的变化幅度。线的长度则代表距离指标同簇样本或基因的相似性高(模式相近)。探针的讯号最大值与讯号最小值的差异>160 为有用信号，筛选出前 295 基因探针进入分析。B：venn 图表示差异 miRNA，蓝色框里显示差异表达的miRNA，上面图表示MRTF-A上调的miRNA，下面图表示MRTF-A下调的 miRNA。Fig 3. miRNA gene chip results. (A) microarray cluster analysis of miRNA. Each row is a chip,and each column is a gene probe. AM refers to MRTF-A+ Aβ25-35group, M refers to MRTF-Agroup, C refers to negative control group, and A refers to Aβ25-35group. The red and green bandsindicate the amplitude of the probe signal up / down changes. The length of the line represents thedistance between the same cluster indicators, the gene or gene similarity (mode similar). Thedifference between the signal maximum value and the signal minimum value of all probes in theprobe is greater than 160, and the first 295 gene probes are screened into the analysis. (B) venn
【参考文献】：
硕士论文
[1]MRTF-A对Tg2576小鼠脑神经元凋亡和自噬的影响及机制研究[D]. 肖弯.武汉科技大学 2016
本文编号：3006823
【文章来源】：武汉科技大学湖北省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
SH-SY5Y细胞模型的建立.转染MRTF-A质粒2.5μg至SH-SY5Y细胞中，48h后，给予40μmol/LAβ25-35处理24h（A）激光共聚焦检测MRTF-A质粒转染结果，绿色为GFP
武汉科技大学硕士学位论文表 1 各组总 RNA 质检结果Tab 1 Total RNA content in each group样本 A260/A280 A260/A230 RNA 总量 RIN 值vector 1.88 2.31 20.50 6.10Vector+ Aβ25-351.87 1.82 12.78 5.80MRTF-A+ Aβ25-351.93 1.45 6.38 6.10MRTF-A 1.86 2.32 24.54 5.70
图 3. miRNA 基因芯片结果分析.A：miRNA 基因芯片聚类分析图。聚类分析图中每一行为一张芯片，每一列为一个基因探针。图中 AM 指 MRTF-A+ Aβ25-35组，M 指 MRTF-A 组，C指 vector 阴性对照组，A 指 Aβ25-35组。红绿色阶标示了探针讯号上/下调的变化幅度。线的长度则代表距离指标同簇样本或基因的相似性高(模式相近)。探针的讯号最大值与讯号最小值的差异>160 为有用信号，筛选出前 295 基因探针进入分析。B：venn 图表示差异 miRNA，蓝色框里显示差异表达的miRNA，上面图表示MRTF-A上调的miRNA，下面图表示MRTF-A下调的 miRNA。Fig 3. miRNA gene chip results. (A) microarray cluster analysis of miRNA. Each row is a chip,and each column is a gene probe. AM refers to MRTF-A+ Aβ25-35group, M refers to MRTF-Agroup, C refers to negative control group, and A refers to Aβ25-35group. The red and green bandsindicate the amplitude of the probe signal up / down changes. The length of the line represents thedistance between the same cluster indicators, the gene or gene similarity (mode similar). Thedifference between the signal maximum value and the signal minimum value of all probes in theprobe is greater than 160, and the first 295 gene probes are screened into the analysis. (B) venn
【参考文献】：
硕士论文
[1]MRTF-A对Tg2576小鼠脑神经元凋亡和自噬的影响及机制研究[D]. 肖弯.武汉科技大学 2016
本文编号：3006823
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