APC/C Cdc20 对G2/M期Akt活性的调控作用

发布时间：2021-02-04 05:40

　　研究背景及目的:Akt是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,在介导生长因子信号中发挥重要作用。Akt调控细胞周期进程,在细胞存活、生长与增殖、糖代谢以及染色体稳定性等生物过程中发挥重要功能。众多研究已经表明,Akt与肿瘤的发生、发展密切相关,是介导肿瘤代谢Warburg效应的重要分子,是一种重要的癌基因。因此,研究Akt蛋白激酶的分子调控机制具有重要的理论价值和潜在的临床应用价值。尽管已有大量文献报道G1-S期Akt相关信号通路的调控机制,但G2/M期Akt的分子调控机制尚不清楚。APC/C泛素E3连接酶作为G2/M期细胞周期演进的最主要调控分子复合体,通过Cdc20和Cdh1这两个激活分子（Activator）,分别识别底物分子的D-box、KEN-box序列,对底物分子进行泛素化修饰,致使蛋白酶体依赖性的底物分子降解,促成细胞周期演进。本研究旨在揭示G2/M期Akt活性变化,探讨APC/C对Akt活性的调控作用及其分子机制。研究方法:（1）用Nocodazole（诺考达唑）对细胞进行同步化处理,使细胞周期阻滞于G2/M期,采用流式细胞术（Flow Cytometry,FCM）加以验证。（2... 

【文章来源】：江苏大学江苏省

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
    1.1 Akt的研究背景
        1.1.1 Akt的结构
        1.1.2 Akt的活化与相关信号通路
        1.1.3 Akt的功能
        1.1.4 Akt与肿瘤的关系
    1.2 细胞周期的研究背景
        1.2.1 细胞周期的分期
        1.2.2 细胞周期的调控
        1.2.3 细胞周期的同步化
    1.3 APC/C的研究背景
        1.3.1 APC/C的结构
        1.3.2 APC/C介导的泛素-蛋白酶体降解途径
        1.3.3 APC/C主要的辅助因子和靶蛋白
        1.3.4 APC/C对细胞周期的调控及其与肿瘤的关系
第二章 研究目的、方法、内容和研究意义
    2.1 研究目的
    2.2 研究方法
    2.3 研究内容
        2.3.1 G2/M期Akt活性变化及其与Cdh1、Cdc20表达水平之间的关系研究
        2.3.2 G2/M期Akt活性调控的分子机制研究
        2.3.3 G2-M期Akt活性下降对细胞凋亡的影响
    2.4 研究意义
第三章 G2/M期Akt活性的变化以及APC/C调控Akt活性的机制
    3.1 实验仪器和材料
        3.1.1 主要的实验仪器
        3.1.2 材料
    3.2 实验方法
        3.2.1 细胞培养
        3.2.2 细胞同步化处理
        3.2.3 同步化细胞蛋白提取和蛋白相对定量
        3.2.4 免疫印迹法（immunoblot）
        3.2.5 质粒的制备
        3.2.6 转染
        3.2.7 流式细胞术（FCM）
            3.2.7.1 流式细胞术检测细胞周期
            3.2.7.2 流式细胞术检测细胞凋亡
    3.3 实验结果
        3.3.1 细胞同步化后细胞形态及细胞周期的变化
        3.3.2 G2/M期Akt活性变化及其与Cdh1、Cdc20表达水平之间的关系研究
        3.3.3 G2/M期Akt活性调控的分子机制研究
        3.3.4 Akt上游调控分子在细胞周期中的变化研究
        3.3.5 G2/M期AKT活性的抑制可促进细胞凋亡
    3.4 讨论
第四章 结论及展望
    4.1 主要结论
    4.2 展望
参考文献
综述：促后期复合物（APC/C）对有丝分裂期（M期）的调控作用
    参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表的学术论文及相关科研成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]PI3K/Akt抑制剂对肺癌细胞化疗药物敏感性的影响[J]. 余祖滨,白莉,张国强,闵家新,肖颖彬.  重庆医学. 2009(11)



本文编号：3017823