体外诱导施万样细胞分化过程中Notch和Neurogulin-1/ErbB信号通路的作用

发布时间：2021-02-06 06:44

　　目的:探究Notch信号和Neurogulin-1/Erb B途径在大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）分化为施万（SCs）样细胞过程中的作用。方法:用高糖培养基分离大鼠BMSCs并用胎牛血清（FBS）、α-MEM培养基进行原代培养,对所得细胞用β-巯基乙醇（β-ME）、全反式维甲酸（RA）、血小板衍生因子（PDGF-AA）、碱性成纤维生长因子（b FGF）、福斯科林Forskolin、Heregulin进行诱导分化后,Notch信号途径分为干细胞对照组、全诱导剂组、阻断剂组,其中阻断剂组在诱导时加入Notch途径阻断剂DAPT。采用定量RT-PCR测定Jagg1配体,Hes1靶基因,Notch1,Dll1的受体蛋白及信号蛋白（S100,p75,GFAP）的表达;CCK-8测定细胞增殖情况;流式细胞仪检测MSCs的凋亡。Neurogulin-1/Erb B途径实验分为经诱导的施万样细胞组,添加Mubritinib组,在分化过程中去除Heregulin组。细胞免疫荧光技术和流式细胞术检测检测细胞分化水平及比率。CCK-8检测各组细胞诱导过程中的增殖能力的变化,Annexin V法检测各组细胞... 

【文章来源】：青岛大学山东省

【文章页数】：50 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
引言
材料和方法
    1 材料
        1.1 主要实验仪器
        1.2 主要实验试剂
    2 方法
        2.1 大鼠MSCs的分离培养（Notch信号途径）
        2.2 MSCs诱导分化
        2.3 细胞分组
        2.4 免疫荧光染色
        2.5 RNA提取和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）基因表达分析
        2.6 细胞计数试剂盒（CCK-8）测定
        2.7 细胞凋亡检测
        2.8 细胞分组（Neurogulin-1/Erb B途径）
        2.9 RNA提取和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）及基因表达的实时PCR分析
        2.10 免疫荧光
        2.11 AnnexinV法检测细胞凋亡[22]
        2.12 CCK-8检测细胞增殖能力
        2.13 数据和统计学分析
结果
    1.1 GFAP,p75,S100结果（Notch途径）
    1.2 CCK-8法测定细胞增殖（Notch途径）
    1.3 细胞凋亡率（Notch途径）
    1.4 RT-PCR检测Jagg1,Hes1,Notch1,Dll1的mRNA水平（Notch途径）
    1.5 MSC定向分化为施万样细胞形态学结果（Neurogulin-1/ErbB途径）
    1.6 Neurogulin-1/ErbB促进SC的增殖能力（Neurogulin-1/ErbB途径）
    1.7 细胞凋亡率的检测结果（Neurogulin-1/ErbB途径）
    1.8 MSC诱导分化为SCs
    1.9 免疫荧光检测S100、p75、GFAP结果（Neurogulin-1/ErbB途径）
    1.10 RT-PCR检测结果（Neurogulin-1/ErbB途径）
    1.11 ErbB2和ErbB3的mRNA表达（Neurogulin-1/ErbB途径）
讨论
参考文献
综述
    综述参考文献
攻读学位期间的研究成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]雪旺氏细胞移植修复脊髓损伤的研究进展[J]. 郭巍,李岩,刘燊,徐云强,冯世庆.  中华实验外科杂志. 2016 (03)
[2]Transplantation of human telomerase reverse transcriptase gene-transfected Schwann cells for repairing spinal cord injury[J]. Shu-quan Zhang,Min-fei Wu,Jia-bei Liu,Ye Li,Qing-san Zhu,Rui Gu.  Neural Regeneration Research. 2015(12)
[3]骨髓间充质干细胞分化的类施万细胞对大鼠脊髓损伤的作用[J]. 宗海斌,李爱国,董玉珍.  广东医学. 2012(22)
[4]成年SD鼠骨髓基质干细胞向神经元样细胞分化过程中分化与凋亡关系的研究[J]. 张蒙夏,谢富康.  中国病理生理杂志. 2003(01)
[5]成人骨髓间质干细胞定向诱导为神经元样细胞的研究[J]. 项鹏,夏文杰,张丽蓉,陈振光,张秀明,李艳,李树浓.  中国病理生理杂志. 2001(05)
[6]γ-分泌酶抑制剂对神经干细胞增殖和分化的影响[J]. 蔡良知3,林玲,胡建石,郑志竑.  中华医学杂志. 2008 (07)

博士论文
[1]Neuregulin在调节神经前体细胞增殖以及少突胶质细胞分化过程中的相关机制[D]. 赖晨.中国科学院研究生院（上海生命科学研究院） 2004



本文编号：3020331