TRIM8调控TNFα与IL-1β诱导的NF-κB激活的分子机制

发布时间：2021-02-09 00:16

　　炎症反应是机体用以抵御病原微生物侵害的一种常见的病理过程。病原微生物感染宿主会诱发大量促炎细胞因子的产生,其中包括肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor, TNF）和白介素1（interleukin-1, IL-1）。促炎细胞因子的产生将诱导转录因子NF-κB（nuclear factor κB）的激活并启动下游炎症相关基因的表达,从而诱发炎症反应。TAK1是TNFa和IL-1β介导的NF-κB和JNK激活的重要组成部分。到目前为止已经有很多报道证实TAK1的多聚泛素修饰能参与了TAK1-介导的信号通路,比如TRAF6介导的TAK1的K34残基上K63-连接的多聚泛素化与TGFβ通路中TAK1的激活有关。然而,TAK1在TNFα和IL-1β信号通路中的分子调节机理还不是十分清楚。因此,我们在一个包含352个泛素相关酶的cDNA文库中筛选影响TNFα和IL-1β诱导的NF-κB激活的基因,并最终鉴定出能够调节NF-κB的分子TRIM8。已有许多文献报道TRIM家族蛋白在调控病毒引起的免疫应答中具有重要作用。在我们的研究中,TRIM8在过量表达时可显著上调由TNFα和IL... 

【文章来源】：武汉大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：97 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
1 研究背景
    1.1 炎症反应及其调节机理
        1.1.1 炎症反应
        1.1.2 促炎细胞因子TNF及其调节机理
        1.1.3 促炎细胞因子IL-1及其调节机理
    1.2 NF-κB信号转导通路及其调节机理
        1.2.1 NF-κB家族蛋白及其调节机理
        1.2.2 IκB家族蛋白及其调节机理
        1.2.3 IKK家族蛋白及其调节机理
        1.2.4 NF-κB信号转导通路调节机理
            1.2.4.1 TNFR介导的经典NF-κB通路
            1.2.4.2 TLR/IL-1R介导的经典NF-κB通路
            1.2.4.3 TRAF2/6介导的IKK活化
            1.2.4.4 TAK1及其介导的IKK和JNK活化
            1.2.4.5 非经典NF-κB通路调节机理
        1.2.5 泛素及其在NF-κB通路中的调控机理
    1.3 TRIM家族在炎症反应中的调控机理
2 实验材料和实验方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞系、细胞培养材料和病毒来源
        2.1.2 细胞因子
        2.1.3 表达载体
        2.1.4 抗体
        2.1.5 核酸操作及检测试剂盒
        2.1.6 特殊仪器和设备
        2.1.7 其它试剂
        2.1.8 其它耗材
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养和瞬时转染
        2.2.2 表达载体构建和质粒纯化
        2.2.3 荧光素酶报告基因实验
        2.2.4 抗体制备
        2.2.5 免疫共沉淀和Western Blot检测
        2.2.6 泛素化实验
        2.2.7 实时定量荧光PCR
        2.2.8 建立稳定细胞系实验
        2.2.9 通过逆转录病毒载体构建稳定表达细胞系
3 实验结果与讨论
    3.1 研究背景与立项依据
    3.2 实验结果与分析
        3.2.1 过量表达TRIM8正调控TNFα和IL-1β信号通路
        3.2.2 下调TRIM8基因的表达抑制NF-κB的激活
        3.2.3 TRIM8突变体抑制TAK1介导的NF-κB的激活
        3.2.4 TRIM8与TAK1具有相互作用
        3.2.5 TRIM8增强TAK1的多聚泛素化
        3.2.6 下调TRIM8基因表达减弱TAK1的K63-连接多聚泛素化
        3.2.7 下调TRIM8基因表达减弱由TNFα和IL-1β诱导的TAK1、IKKα/β以及IκBα的磷酸化
        3.2.8 下调TRIM8表达抑制IκBα的降解
        3.2.9 TRIM8增强TNFα和IL-β介导的AP1的激活
    3.3 实验讨论与展望
参考文献
縮略词表
作者简介
致谢



本文编号：3024727