巨噬细胞条件性Atg5基因敲除小鼠的构建及鉴定

发布时间：2021-02-10 03:12

　　目的构建并鉴定巨噬细胞条件性Atg5基因敲除小鼠,为研究巨噬细胞自噬在肾脏疾病发病机制中的作用提供动物模型。方法将引进LysM-Cre小鼠与Atg5^flox/+小鼠进行杂交、Atg5^flox/+小鼠自交,分别获得基因型为Atg5^flox/+Cre^+/-和Atg5^flox/flox Cre^-/-的子代小鼠;将上述两种基因型的子代小鼠杂交,得到巨噬细胞条件性Atg5基因敲除小鼠(Atg5 ^flox/floxCre^+/-,Atg5^-/-)和对照小鼠(Atg5 ^flox/floxCre^-/-,Atg5^+/+)。提取小鼠鼠尾组织基因组DNA,经PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳后,在DNA水平判断小鼠基因型;提取小鼠骨髓来源巨噬细胞RNA和蛋白,利用基因测序和Western blot技术检验Atg5基因的敲除效果。结果成功建立巨噬细胞条件性At... 

【文章来源】：中国实验动物学报. 2019,27(06)北大核心

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

小鼠繁殖方案

部分小鼠基因型PCR鉴定

使用雷帕霉素(Rap)诱导自噬后,Atg5-/-小鼠巨噬细胞自噬不能恢复到正常基础水平,提示Atg5-/-小鼠巨噬细胞自噬缺陷;综上,巨噬细胞条件性Atg5基因敲除小鼠构建成功。3 讨论

【参考文献】：
期刊论文
[1]维生素D受体基因敲除小鼠品系的建立与鉴定[J]. 赵家荣,刘欢,张涛,王令,路宏朝,杜伟立.  中国实验动物学报. 2018(06)
[2]Caveolin-1基因敲除小鼠子代基因型的鉴定及繁育方法[J]. 周胜强,罗东,黄素芬,易健,刘柏炎.  中国实验动物学报. 2016(03)



本文编号：3026692