钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶ⅡδRNA干扰对下游基因表达及破骨细胞分化的影响

发布时间：2021-02-13 06:52

　　目的研究钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱδ（Ca2+/Calmodulin dependent kinaseⅡδ,Ca MKⅡδ）RNA干扰对下游基因表达及破骨细胞分化的影响,以证实其在破骨细胞分化中的作用。方法应用慢病毒构建Ca MKⅡδRNA干扰载体,并确定最佳感染复数（multiplicity of infection,MOI）值及转染效率。小鼠RAW264.7细胞分为对照组、空白载体组和干扰组。转染5 d后收获细胞,确定干扰效率;并检测RNA干扰对活化T细胞核因子蛋白c1（NFATc1）、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）、非受体酪氨酸激酶（c-Src）基因表达及破骨细胞分化的影响。结果成功构建了Ca MKⅡδRNA干扰载体,最佳转染MOI值为30,转染效率可达78%（P<0.05）。重组病毒对Ca MKⅡδ的干扰效率在mRNA水平超过78%,在蛋白水平超过70%（P<0.01）。Ca MKⅡδRNA干扰显著降低NFATc1、TRAP和c-Src基因,与对照组、空白载体组比较,其mRNA水平下降分别超过了47.8%、43.3%和48.5%（P<0.05,P<... 

【文章来源】：第三军医大学学报. 2017,39(01)北大核心

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 实验材料
    1.2 Ca MKⅡδ干扰载体构建及转染效率测定
    1.3 实验分组
    1.4 干扰效率测定
        1.4.1 Real-time PCR检测
        1.4.2 Western blot检测
    1.5 Ca MKⅡδRNA干扰对NFATc1、TRAP、c-Src基因表达的影响
        1.5.1 免疫荧光化学检测
        1.5.2 Real-time PCR检测
        1.5.3 Western blot检测
    1.6 破骨细胞生成及功能检测
        1.6.1 TRAP染色
        1.6.2 骨吸收陷窝检测
    1.7 统计学分析
2 结果
    2.1 转染最佳MOI值及转染效率
    2.2 干扰效率测定
    2.2 Ca MKⅡδRNA干扰对下游因子NFATc1、TRAP、c-Src基因表达的影响
        2.2.1 经免疫荧光细胞化学检测
        2.2.2 Real-time PCR检测
        2.2.3 Western blot检测
    2.3 Ca MKⅡδRNA干扰对破骨细胞分化和骨吸收的影响
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]唑来膦酸对破骨细胞分化中钙调蛋白和钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ基因表达的影响[J]. 李鹏,林珏杉,张鹏,董伟,李金源,戚孟春.  中华口腔医学杂志. 2013 (11)



本文编号：3032134