人乳头瘤病毒16/35/31型交叉疫苗研究

发布时间：2021-02-16 07:34

　　每年全球新发癌症病例中5%是由人乳头瘤病毒（Human papillomavirus,HPV）引发的癌症（包括女性宫颈癌、阴道癌、男性阴茎癌等）,其中宫颈癌病例一直高居于女性恶性肿瘤疾病的第二位。在国内,每年据统计有将近10万例之多的宫颈癌病例产生,且发病越来越趋于年轻化。而99.7%的宫颈癌病例都是因HPV感染所引发的,所以HPV疫苗的研发一直是世界各国争相研究的热点。目前,默克公司的Gardasil（?）、史克公司的Cervarix（?）为先后上市的两大宫颈癌疫苗以及默克公司的Gardasil（?）9。这三种疫苗的主要成分均是由HPV的重组病毒样颗粒（virus-likeparticles,VLPs）构成。研究表明一定条件下VLP能够在体外自组装,其具有与真病毒颗粒相似的构象和近乎相同的中和表位,进入机体后能够激发体内相应的免疫应答,预防HPV病毒的入侵,且VLP不包裹遗传物质DNA不具有相应的复制能力,已被作为主流的HPV疫苗形式。但真核表达系统带来昂贵的成本、复杂的生产工艺以及随着抗原种类以及剂量增加带来更多的不良反应等问题,迫切需要一类生产成本低廉、安全系数高、保护范围更加广... 

【文章来源】：厦门大学福建省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：109 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
缩略词
第一章 前言
    1 HPV简介
        1.1 HPV概述
        1.2 HPV病毒学和分子生物学
        1.3 HPV分型
        1.4 HPV流行病学研究
        1.5 HPV生活史 & 感染机制研究
        1.6 HPV预防性疫苗研究进展
        1.7 HPV结构研究进展
        1.8 HPV中和表位研究进展
第二章 材料与方法
    1 仪器
    2 实验材料
        2.1 菌株、质粒和基因
        2.2 酶、单抗和实验动物
        2.3 工作站和软件
        2.4 其他试剂
        2.5 常见溶液及试剂盒
    3 方法
        3.1 分子克隆相关生物学实验方法
        3.2 蛋白质的诱导表达和纯化方法
        3.3 透射电子显微镜观察样品
        3.4 低温电镜重构VLP的三维结构
        3.5 差示量热扫描实验
        3.6 分析超离法测定样品沉降系数
        3.7 酶联免疫吸附分析检测HPV L1蛋白的抗原性-间接法
        3.8 动物免疫及单克隆抗体相关方法
        3.9 假病毒系统—中和抗体检测实验
第三章 结果与分析
    第一部分: HPV16/35/31结构及亲缘关系分析对比
        第一部分 小结
    第二部分: HPV16/35两型型交叉疫苗研究
        1 表达载体的构建
        2 突变VLP颗粒制备
            2.1 小量蛋白表达鉴定
            2.2 中量蛋白表达
            2.3 HPV突变L1蛋白的层析纯化
            2.4 突变蛋白组装
            2.5 分子筛层析分析
        3 突变蛋白VLP颗粒性鉴定
            3.1 HPSEC分析
            3.2 透射电镜负染观察颗粒构
            3.3 AUC分析颗粒均一稳定性
        4 DSC分析突变蛋白热稳定性
        5 突变VLP抗原性分析
        6 H16/35突变VLP的免疫评价
            6.1 初步免疫评价
            6.2 剂量依赖免疫评价
            6.3 ED50（半数有效剂量）评价
        第二部分 小结
    第三部分: HPV16/35/31三型型交叉疫苗研究
        1 表达载体的构建
        2 突变VLP颗粒制备
            2.1 小量蛋白表达鉴定
            2.2 中量蛋白表达
            2.3 HPV突变L1蛋白的层析纯化
            2.4 突变蛋白组装
            2.5 分子筛层析分析
        3 突变蛋白VLP颗粒性鉴定
            3.1 HPSEC分析
            3.2 透射电镜负染观察颗粒构
            3.3 AUC分析颗粒均一稳定性
        4 DSC分析突变蛋白热稳定性
        5 H16/35/31突变VLP的免疫评价
            5.1 初步免疫评价
            5.2 剂量依赖免疫评价
            5.3 ED50（半数有效剂量）评价
        第三部分 小结
    第四部分 讨论
        1 型交叉疫苗在HPV疫苗中的应用前景
        2 型交叉疫苗免疫评价
        3 HPV交叉免疫机制
        4 HPV结构研究
    第五部分 小结与展望
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]冷冻电镜技术的突破导致结构生物学发生革命性变化[J]. 尹长城.  中国生物化学与分子生物学报. 2018(01)
[2]HPV治疗性疫苗研究现状[J]. 王卡娜,郄明蓉.  实用妇产科杂志. 2017(02)
[3]已上市人乳头瘤病毒疫苗的概况及其在国内的临床研究进展[J]. 舒雅俊,汤妍,苏家立,张吉凯.  中国生物制品学杂志. 2016(10)
[4]宫颈癌的研究新进展[J]. 蒋雪梅,李华,顿耀艳.  现代医药卫生. 2015(21)
[5]人乳头瘤病毒疫苗预防宫颈癌的应用[J]. 夏巧凡,何莲芝.  国际妇产科学杂志. 2015(04)
[6]新疆汉族、维吾尔族、哈萨克族妇女生殖道人乳头瘤病毒感染状况分析[J]. 陈志芳,马合甫扎,丁岩,马新华.  中国实用妇科与产科杂志. 2011(08)
[7]抗原表位研究方法进展[J]. 宋帅,李春玲,贾爱卿,杨冬霞,李淼.  动物医学进展. 2010(12)
[8]HPV感染相关因素与预防[J]. 杨桂芳.  临床医学工程. 2010(02)
[9]HPV疫苗的现状及问题[J]. 雷曼殊,张蔚,陈娇.  医学研究杂志. 2010(01)
[10]抗原表位预测方法的研究进展[J]. 王艳华,张德林,殷宏,付宝权.  中国兽医科学. 2009(10)

博士论文
[1]两类重要蛋白的分子动力学模拟及蛋白质对接方法的研究[D]. 孟烜宇.吉林大学 2011

硕士论文
[1]消减免疫法筛选HPV型间杂合颗粒特异单克隆抗体及其表位研究[D]. 陆剑.厦门大学 2014



本文编号：3036426