携带HIV-1gag及gp160/gp145基因的rAd5及rAAV2/1疫苗诱导免疫反应差异的研究

发布时间：2021-02-17 09:30

　　自首例艾滋病（Acquired Immune Deficiency Syndrom，AIDS）报道以来，艾滋病疫苗的研制工作一直在持续，但至今仍没有艾滋病疫苗问世。本研究小组用多种艾滋病疫苗进行序贯联合免疫取得了一定的效果。为了更合理地应用序贯联合免疫策略，有必要深入了解每种疫苗单独以及与其他疫苗联合应用的特点。腺病毒载体和腺相关病毒载体是在疫苗和基因治疗领域应用较广的两种载体，安全性也已得到验证，所以我们选择这两种病毒载体疫苗作为候选疫苗。本研究旨在对前期工作中观察到的腺相关病毒疫苗诱导的细胞和体液免疫反应分离的现象进行深入研究，同时研究这种现象能否在其他基因中再现以及腺病毒和腺相关病毒两种病毒载体携带不同的基因进行单独及联合免疫所诱发的免疫反应的差异，为疫苗和基因治疗的研究提供新的思路。本文将携带HIV-1gag基因的rAd5及rAAV2/1疫苗免疫BALB/c小鼠后，用ELISA方法检测血清中Gag特异性及载体特异性的IgG抗体的滴度，用ELISPOT方法检测细胞免疫反应。结果显示，rAd5-gag可诱导较强的Gag特异性细胞免疫反应，同时也可产生载体特异性细胞免疫反应，Gag特... 

【文章来源】：北京工业大学北京市 211工程院校

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
主要英文缩写词
摘要
Abstract
第1章 绪论
第2章 携带HIV-1gag基因的rAd5及rAAV2/1疫苗诱导免疫反应差异的研究
    2.1 材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 疫苗成分及来源
        2.1.3 刺激物（阳性刺激物、阴性刺激物及肽库）来源
        2.1.4 培养基和试剂
        2.1.5 实验仪器
    2.2 方法
        2.2.1 小鼠免疫方案
        2.2.2 血清和脾脏淋巴细胞的采集
        2.2.3 ELISPOT实验
        2.2.4 ELISA检测小鼠血清中 Gag 特异性和载体特异性体液免疫反应
    2.3 实验结果
        2.3.1 rAd5-gag和 rAAV2/1-gag在小鼠体内诱导的载体特异性及Gag特异性细胞免疫反应
        2.3.2 rAd5-gag和 rAAV2/1-gag在小鼠体内诱导的载体特异性及P24特异性IgG 抗体反应
    2.4 讨论
    2.5 本章小结
第3章 利用小鼠活体成像技术比较研究rAd5和rAAV2/1两种载体的差异
    3.1 材料
        3.1.1 细胞
        3.1.2 载体成分及来源
        3.1.3 试剂
        3.1.4 主要仪器设备
        3.1.5 实验动物
    3.2 方法
        3.2.1 rAd5-Luc病毒滴度的测定
        3.2.2 小鼠免疫
        3.2.3 小鼠体内活体成像检测
    3.3 结果
        3.3.1 rAd5-Luc滴度的测定
        3.3.2 小鼠活体成像结果
    3.4 讨论
    3.5 本章小结
第4章 携带HIV-1 gp160/gp145基因的rAd5及rAAV2/1疫苗诱导免疫反应差异的研究
    4.1 材料
        4.1.1 菌株和质粒
        4.1.2 细胞
        4.1.3 疫苗成分及来源
        4.1.4 假病毒
        4.1.5 工具酶和试剂
        4.1.6 抗体
        4.1.7 主要仪器设备
        4.1.8 实验动物
    4.2 方法
        4.2.1 pSNAV2.0-neo-gp145质粒的构建及鉴定
        4.2.2 rAAV2/1 苗rAAV2/1-gp145的构建流程
        4.2.3 小鼠免疫
        4.2.4 血清和脾脏淋巴细胞的采集
        4.2.5 酶联免疫斑点法（ELISPOT）筛选肽库和检测细胞免疫反应
        4.2.6 ELISA法检测体液免疫反应
    4.3 结果
        4.3.1 pSNAV2.0-neo和 pSNAV1.0-gp145 限制性内切酶酶切电泳图谱
        4.3.2 构建rAAV2/1表达质粒 pSNAV2.0-neo-gp145
        4.3.3 重组质粒pSNAV2.0-neo-gp145的酶切鉴定
        4.3.4 重组质粒pSNAV2.0-neo-gp145的测序鉴定
        4.3.5 pSNAV2.0-neo-gp145瞬时转染BHK细胞后gp145基因表达的鉴定
        4.3.6 细胞株BHK-gp145中gp145基因表达的鉴定
        4.3.7 rAAV2/1-gp145疫苗的感染性检测
        4.3.8 用 ELISPOT法对HIV-1gag进行肽库的筛选和细胞免疫反应检测
        4.3.9 ELISA方法检测体液免疫反应
    4.4 讨论
        4.4.1 疫苗载体的选择
        4.4.2 载体疫苗所携带基因的选择
        4.4.3 免疫方案和免疫效果的分析
    4.5 本章小结
结论
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文
致谢



本文编号：3037788