肠道病毒71型疫苗的交叉保护作用及其基因重组耻垢分枝杆菌疫苗的构建
发布时间：2021-02-22 19:07
目的:手足口病是由二十多型肠道病毒引起的常见传染病,目前仅肠道病毒71型（Enterovirus 71,EV71）有上市疫苗,难以控制手足口病的流行。鉴于肠道病毒型间交叉反应性时有报道以及肠道病毒型间序列的高度同源性,本研究首先探讨EV71灭活疫苗对手足口病多种病原的交叉保护作用,明确EV71疫苗预防其他手足口病病原的价值;其次,本研究利用具有交叉中和作用的EV71表位VP1-SP70和VP2-141,以及兼具佐剂活性和外源基因投递能力的耻垢分枝杆菌作为载体,构建可预防多种肠道病毒的基因重组耻垢分枝杆菌疫苗,探讨耻垢分枝杆菌用于构建手足口病疫苗的价值。方法:1.扩增培养18个型别肠道病毒分离株,测定其滴度;EV71灭活疫苗免疫大鼠制备抗血清,微量中和试验检测抗血清中EV71中和抗体效价及对其他手足口病病原的交叉中和抗体效价。PCR扩增肠道病毒P1片段后进行序列测定,测序结果用clustalx软件多序列比对后利用MEGA6构建系统进化树。2.以质粒pC149/mut-HBc-E1/2为模板,PCR扩增嵌合EV71中和表位VP1-SP70（E1）和VP2-141（E2）的融合基因HBc-E...
【文章来源】：桂林医学院广西壮族自治区
【文章页数】：87 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
EV71灭活疫苗免疫大鼠的抗血清对部分肠道病毒具有交叉中和作用Fig.1TheantiserumofEV71inactivatedvaccinehadcross-neutralizationeffectonsomeenteroviruses（A）正常RD细胞和EV71感染的RD细胞（400×）
46图 3 pC149/mut-HBc-E1/2 的扩增和鉴定Fig.3 Amplification and identification of pC149/mut-HBc-E1/2（A）pC149/mut-HBc-E1/2 图谱。 水平条表示嵌合的目的蛋白 HBc-E1/2。（B）pC149/mut-HBc质粒经 Nde I 和 HindIII 双酶切鉴定图。（C）pC149/mut-HBc-E1/2 质粒测序峰图。
图 4 HBc-E1/2 在大肠杆菌中的表达及纯化Fig.4 Expression and Purification of HBc-E1/2 in E.coli（A）DTT 处理样本的 SDS-PAGE 图。 M：彩色预染蛋白质 Marker ；1：ER2566:HBc-E1/2 IPTG前菌液；2：ER2566:HBc-E1/2 IPTG 6h 菌液；3：HBc-E1/2 纯化蛋白。（B）未经 DTT 处理样本的SDS-PAGE 图。M：彩色预染蛋白质 Marker；1：ER2566:HBc-E1/2 IPTG 前菌液；2：ER2566:HBc-E1/2IPTG 6h 菌液；3：HBc-E1/2 纯化蛋白。（C）抗 VP1-SP70 的 Western Blot 图。 M：彩色预染蛋白质Marker ；1、2、3 分别为 DTT 处理的 ER2566:HBc-E1/2 IPTG 前菌液、ER2566:HBc-E1/2 IPTG 6h菌液和 HBc-E1/2 纯化蛋白；4、5、6 分别为未经 DTT 处理的 ER2566:HBc-E1/2 IPTG 前菌液、ER2566:HBc-E1/2 IPTG 6h 菌液和 HBc-E1/2 纯化蛋白。（D）抗 VP2-141 的 Western Blot 图。 M：彩色预染蛋白质 Marker ；1、2、3 分别为 DTT 处理的 ER2566:HBc-E1/2 IPTG 前菌液、ER2566:HBc-E1/2IPTG 6h 菌液和 HBc-E1/2 纯化蛋白；4、5、6 分别为未经 DTT 处理的 ER2566:HBc-E1/2 IPTG 前菌液、ER2566:HBc-E1/2 IPTG 6h 菌液和 HBc-E1/2 纯化蛋白。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Bioinformatic Analysis of Non-VP1 Capsid Protein of Coxsackievirus A6[J]. 刘洪波,阳广菲,梁思佳,林军. Journal of Huazhong University of Science and Technology（Medical Sciences）. 2016(04)
[2]Hand Foot and Mouth Disease Due to Enterovirus 71 in Malaysia[J]. Kaw Bing Chua,Abdul Rasid Kasri. Virologica Sinica. 2011(04)
[3]自噬抑制剂3-MA抑制EV71病毒颗粒的产生与释放[J]. 张晓延,郗雪艳,赵振东. 中华实验和临床病毒学杂志. 2011 (03)
[4]Expression and immunoactivity of chimeric particulate antigens of receptor binding site-core antigen of hepatitis B virus[J]. Hai-Jie Yang, Min Chen, Tong Cheng, Shui-Zhen He, Shao-Wei Li, Bao-Quan Guan, Ying Gu, Zi-Heng Zhu, Jun Zhang, Ning-Shao Xia, The Key Laboratory of Ministry of Education for Cell Biology and Tumor Cell Engineering, Xiamen University, Xiamen 361005, Fujian Province, China. World Journal of Gastroenterology. 2005(04)
本文编号：3046430
【文章来源】：桂林医学院广西壮族自治区
【文章页数】：87 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
EV71灭活疫苗免疫大鼠的抗血清对部分肠道病毒具有交叉中和作用Fig.1TheantiserumofEV71inactivatedvaccinehadcross-neutralizationeffectonsomeenteroviruses（A）正常RD细胞和EV71感染的RD细胞（400×）
46图 3 pC149/mut-HBc-E1/2 的扩增和鉴定Fig.3 Amplification and identification of pC149/mut-HBc-E1/2（A）pC149/mut-HBc-E1/2 图谱。 水平条表示嵌合的目的蛋白 HBc-E1/2。（B）pC149/mut-HBc质粒经 Nde I 和 HindIII 双酶切鉴定图。（C）pC149/mut-HBc-E1/2 质粒测序峰图。
图 4 HBc-E1/2 在大肠杆菌中的表达及纯化Fig.4 Expression and Purification of HBc-E1/2 in E.coli（A）DTT 处理样本的 SDS-PAGE 图。 M：彩色预染蛋白质 Marker ；1：ER2566:HBc-E1/2 IPTG前菌液；2：ER2566:HBc-E1/2 IPTG 6h 菌液；3：HBc-E1/2 纯化蛋白。（B）未经 DTT 处理样本的SDS-PAGE 图。M：彩色预染蛋白质 Marker；1：ER2566:HBc-E1/2 IPTG 前菌液；2：ER2566:HBc-E1/2IPTG 6h 菌液；3：HBc-E1/2 纯化蛋白。（C）抗 VP1-SP70 的 Western Blot 图。 M：彩色预染蛋白质Marker ；1、2、3 分别为 DTT 处理的 ER2566:HBc-E1/2 IPTG 前菌液、ER2566:HBc-E1/2 IPTG 6h菌液和 HBc-E1/2 纯化蛋白；4、5、6 分别为未经 DTT 处理的 ER2566:HBc-E1/2 IPTG 前菌液、ER2566:HBc-E1/2 IPTG 6h 菌液和 HBc-E1/2 纯化蛋白。（D）抗 VP2-141 的 Western Blot 图。 M：彩色预染蛋白质 Marker ；1、2、3 分别为 DTT 处理的 ER2566:HBc-E1/2 IPTG 前菌液、ER2566:HBc-E1/2IPTG 6h 菌液和 HBc-E1/2 纯化蛋白；4、5、6 分别为未经 DTT 处理的 ER2566:HBc-E1/2 IPTG 前菌液、ER2566:HBc-E1/2 IPTG 6h 菌液和 HBc-E1/2 纯化蛋白。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Bioinformatic Analysis of Non-VP1 Capsid Protein of Coxsackievirus A6[J]. 刘洪波,阳广菲,梁思佳,林军. Journal of Huazhong University of Science and Technology（Medical Sciences）. 2016(04)
[2]Hand Foot and Mouth Disease Due to Enterovirus 71 in Malaysia[J]. Kaw Bing Chua,Abdul Rasid Kasri. Virologica Sinica. 2011(04)
[3]自噬抑制剂3-MA抑制EV71病毒颗粒的产生与释放[J]. 张晓延,郗雪艳,赵振东. 中华实验和临床病毒学杂志. 2011 (03)
[4]Expression and immunoactivity of chimeric particulate antigens of receptor binding site-core antigen of hepatitis B virus[J]. Hai-Jie Yang, Min Chen, Tong Cheng, Shui-Zhen He, Shao-Wei Li, Bao-Quan Guan, Ying Gu, Zi-Heng Zhu, Jun Zhang, Ning-Shao Xia, The Key Laboratory of Ministry of Education for Cell Biology and Tumor Cell Engineering, Xiamen University, Xiamen 361005, Fujian Province, China. World Journal of Gastroenterology. 2005(04)
本文编号：3046430
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