金丝桃素光动力疗法治疗类风湿关节炎动物模型的实验研究

发布时间：2017-04-14 09:19

  本文关键词：金丝桃素光动力疗法治疗类风湿关节炎动物模型的实验研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景和目的:类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以全身手足小关节对称性、侵蚀性炎症表现为主的自身免疫性疾病(autoimmune diseases,AID),其主要病理特点为慢性滑膜炎及滑膜的持续增生,呈绒毛状突入关节内,逐步侵蚀关节软骨、软骨下骨质以及附属结构,引起全身多发小关节肿胀、疼痛,最终破坏其正常功能,导致关节畸形和功能丧失。其病因和发病机制尚不明了。现今常规RA用药包括非甾体类抗炎药(non-steroidal anti-inflammatory drugs,NSAIDs)、激素、改善病情抗风湿药(disease-modifyinganti-rheumatic drugs,DMARDs)、生物制剂并不能够及时制止病情的发展改善患者的远期症状并且有较强的毒副作用。所以,寻找新的改善RA病情药物仍然是临床面临的挑战性问题。光动力疗法已广泛用于肿瘤的治疗,RA的炎性滑膜生长活跃、代谢旺盛,类似肿瘤组织。此前已有实验证明培养的类风湿滑膜细胞能迅速吸收光敏剂金丝桃素,通过光动力疗法对类风湿滑膜细胞有明显的杀伤效应。本研究在此基础上,利用类风湿关节炎的动物模型,进行以下研究:(1)了解以金丝桃素为光敏剂的光动力效应对类风湿性关节炎模型的治疗作用;(2)初步探索这一作用的机制。观察中药光敏剂金丝桃素对Ⅱ型胶原诱导关节炎模型(CIA)小鼠关节肿胀、关节炎指数及后足踝关节组织病理变化的影响,明确金丝桃素光动力疗法对CIA模型小鼠的治疗作用,同时观察金丝桃素光动力疗法对小鼠血清TNF-a及IL-1β表达水平的影响,初步探讨金丝桃素光动力疗法治疗RA的潜在机制。方法:将Ⅱ型胶原溶于0.1 mol·L-1的醋酸,然后和等量完全弗氏佐剂充分乳化,于C57BL/6小鼠尾根部皮内注射0.1ml,21d后重复注射等量乳化剂加强免疫,建立CIA小鼠模型。选用造模成功的小鼠,随机分为模型对照组、甲氨蝶呤组、金丝桃素高剂量治疗组和金丝桃素低剂量治疗组,未造模小鼠设为正常对照组;从初次免疫后第28天起,正常对照组及模型对照组给予生理盐水腹腔注射,不给予药物治疗,金丝桃素高剂量处理组给予足底皮内注射浓度为20μmol/L的金丝桃素,金丝桃素低剂量处理组给予足底皮内注射浓度为10μmol/L的金丝桃素,以上两组注射药物后均进行光照30min,2天一次,连续30天。甲氨蝶呤组给予腹腔注射甲氨蝶呤注射液,3.6mg/kg,每周1次,连续4周,动态观察小鼠体重、后足足踝关节肿胀度、关节炎指数等指标的变化;选于最后一次给药3小时后处死小鼠,取各组小鼠后足踝关节,通过HE染色观察;采集小鼠血清,酶联免疫吸附法(ELISA)检测TNF-a及IL-1β的含量。将各组数据汇总整理后,经SPSS 17.0统计软件分析各组数据,得出结论。结果:与正常组小鼠相比,模型组小鼠后足关节红肿明显,伴跛行,后足关节肿胀度、关节炎指数显著升高,血清TNF-a及IL-1β水平也显著升高(P0.05);与模型组比较,各用药组小鼠后足关节红肿减轻,活动度可,后足关节肿胀度、关节炎指数及血清TNF-α、IL-1β水平均明显降低(P0.05);其中金丝桃素高剂量治疗组与其他两个用药组比较,后足关节肿胀度、关节炎指数及血清TNF-α、IL-1β水平均明显降低,有统计学意义(P0.05);模型组HE染色显示后足踝关节被明显的炎性细胞浸润,滑膜细胞增生显著,可观察到关节软骨破坏,关节畸形;与模型组比较,各用药组炎性细胞浸润、滑膜细胞增生、关节软骨破坏、血管翳生成均减少;金丝桃素高剂量治疗组与其他两个用药组比较,炎性细胞浸润及增生滑膜较少,关节骨与软骨破坏、畸形程度较轻。结论:金丝桃素光动力疗法对类风湿关节炎模型CIA小鼠关节肿胀有明显的减轻作用,还可改善关节滑膜、软骨的病理学形态,其作用机制可能通过金丝桃素是抑制致炎因子TNF-a及IL-1β,以达到抗炎消肿保护关节的目的。
【关键词】：金丝桃素 光动力 类风湿关节炎 TNF-a IL-1β
【学位授予单位】：安徽中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R259;R-332
【目录】：

• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-11
• 英文缩略词表11-12
• 1 前言12-16
• 2 实验材料16-17
• 2.1 实验动物16
• 2.2 实验试剂16
• 2.2.1 制备RA动物模型主要试剂16
• 2.2.2 PDT实验主要试剂及药物16
• 2.3 主要仪器与设备16-17
• 3 实验方法17-22
• 3.1 RA动物模型的制备17-18
• 3.1.1 胶原乳化剂的制备17
• 3.1.2 模型免疫方法17-18
• 3.2 实验试剂配制18-19
• 3.3 分组及给药方案19
• 3.4 CIA模型小鼠一般情况观察评价19-22
• 3.4.1 体重、毛色、摄食19
• 3.4.2 关节肿胀程度测量19
• 3.4.3 关节炎指数评分19-20
• 3.4.4 HE染色观察对CIA小鼠踝关节病理学改变的影响20-21
• 3.4.5 酶联免疫吸附法21-22
• 4 统计学处理22
• 5 结果22-31
• 5.1 CIA小鼠模型的建立结果22
• 5.2 金丝桃素对小鼠类风湿关节炎的治疗作用22-31
• 5.2.1 HY-PDT对CIA小鼠一般情况的影响22-24
• 5.2.2 HY-PDT对CIA小鼠体重增长的影响24
• 5.2.3 HY-PDT对CIA小鼠后足厚度的改善作用24-26
• 5.2.4 HY-PDT对CIA小鼠关节炎指数的改善作用26-27
• 5.2.5 HY-PDT对CIA小鼠后足踝关节组织病理学变化的改善作用27-29
• 5.2.6 HY-PDT对CIA小鼠血清TNF-α及IL-1β水平的影响29-31
• 6 讨论31-36
• 6.1 RA动物模型的选择31-32
• 6.2 TNF-α、IL-1β等细胞因子在RA发病中起着关键作用32
• 6.3 中医对类风湿性关节炎的认识及治则32-33
• 6.4 西医学对类风湿性关节炎的治疗现状33-35
• 6.5 HY-PDT治疗机制35-36
• 7 总结36-37
• 8 不足与展望37
• 8.1 不足37
• 8.2 展望37
• 参考文献37-42
• 综述 类风湿关节炎的治疗研究进展42-49
• 参考文献46-49
• 个人简介49
• 发表论文目录49-50
• 致谢50

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