UPLC-MS/MS法同时测定糖尿病模型大鼠血浆中沙格列汀及其代谢产物5-羟基沙格列汀浓度

发布时间：2021-03-06 09:15

　　目的:建立同时测定糖尿病模型大鼠体内沙格列汀及其代谢产物5-羟基沙格列汀血药浓度的方法。方法:采用超高效液相色谱-串联质谱法。色谱柱为Waters BEH Shield RP₁₈,流动相为10 mmol/L乙酸铵-乙腈（70∶30,V/V）,流速为0.3 m L/min,柱温为30℃,进样量为10μL;扫描模式为多反应监测,正离子模式,各离子对为m/z 316.2→180.2（沙格列汀）、m/z 332.3→196.2（5-羟基沙格列汀）、m/z 304.2→153.9（维格列汀,内标）。取6只SD大鼠,复制糖尿病模型后,ig沙格列汀0.53 mg/kg,于给药前及给药后0.25、0.5、0.75、1.0、1.5、2.0、4.0、6.0、8.0、12.0、24.0 h经眼眶取血0.25 m L,测定血浆中沙格列汀及其代谢物5-羟基沙格列汀的浓度,采用Win Nonlin 6.1软件计算药动学参数。结果:沙格列汀和5-羟基沙格列汀的质量浓度线性范围为0.1¹00（r=0.997 2）、0.2²00 ng/m L（r=0.9... 

【文章来源】：中国药房. 2017,28(16)北大核心

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5.9％～107.8％、83.5％～88.2％（RSD均小于10.3％，n＝6）；稳定性试验（室温放置24h、－80℃和室温下反复冻融3次、－80℃冻存90d及吹干后残渣在室温放置24h）峰面积的RSD≤11.0％（n＝5）。2.8药动学研究取6只大鼠，高脂饲料喂养1个月后，ip链脲佐菌素诱导T2DM模型。造模前禁食、自由饮水12h。按临床上沙格列汀给药剂量进行换算，ig0.53mg/kg沙格列汀溶液，分别于给药前和给药后0.25、0.5、0.75、1.0、1.5、2.0、4.0、6.0、8.0、12.0、24.0h经大鼠眼眶静脉丛取血0.25mL，置于经抗凝处理的离心管中，3500r/min离心图1二级碎片全扫描质谱图Fig1Fullscanningproductionspectraofthesecond-aryfragments4.0×1053.2×1052.4×1051.6×1058.0×1040度强，psc150200250300350m/zA.沙格列汀2.8×1072.4×1072.0×1071.6×1071.2×1078.0×1064.0×1060度强，psc60120180240300340m/zB.5-羟基沙格列汀1.00×1088.00×1076.00×1074.00×1072.00×1070度强，psc60120180240300340m/zC.内标图2超高效液相色谱图Fig2UPLCchromatograms400200强度0，psc0.40.81.21.62.02.42.8时间，minA.空白血浆3.7×1042.0×104强度0，psc400200强度0，psc400200强度0，psc0.40.81.21.62.02.42.8时间，minB.空白血浆+沙格列汀+5-羟基沙格列汀+内标2.0×1041.0×1040度强，psc3.6×1042.0×1040度强，psc3.0×1051.0×105强度0，psc0.40.81.21.62.02.42.8时间，minC.给药0.5h后大鼠血浆样品+内标3.8×1042.0×10407.4×1044.0×104

ChinaPharmacy2017Vol.28No.16中国药房2017年第28卷第16期5min，分离血浆，置于－80℃冰箱保存，备用。采用超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）法测定不同时间点的沙格列汀和5-羟基沙格列汀的血药浓度，药-时曲线见图3。采用WinNolin6.1软件按照非房室模型进行处理，计算药动学参数，结果见表1。3讨论本文建立了稳定性好、通用性强、可灵敏快速测定大鼠血浆中沙格列汀及其代谢物5-羟基沙格列汀血药浓度的方法，并成功地应用于大鼠药动学研究。本实验起初采用BEHC18色谱柱，使用甲醇作为流动相，结果5-羟基沙格列汀的定量下限达不到检测要求；在流动相中添加乙腈后5-羟基沙格列汀的响应值提高，但检测物峰形变差。使用WatersBEHShieldRP18色谱柱摸索方法时流动相水相尝试过0.1％甲酸、0.1％甲酸-5mmol/L甲酸铵，但是随着水相比例的增加检测物的峰形变差且分叉成双峰，故选择不添加甲酸，且试验发现添加乙酸铵比添加甲酸铵灵敏度高、响应好，故最终选择10mmol/L乙酸铵-乙腈作为流动相体系。样品处理时考虑到沙格列汀游离碱在水中微溶，在二氯甲烷及乙酸乙酯中溶解，但5-羟基沙格列汀的水溶性好，用乙酸乙酯、二氯甲烷基本无法提取，因此液液萃取同时提取两者比较困难，常规的液液萃取处理方法不适合该血浆样品的处理。而乙腈蛋白质沉淀法处理血浆样品的基质效应及提取回收率均满足相关的要求[11]，故最终采用乙腈蛋白质沉淀法预处理。综上所述，本研究建立的方法简便、准确、专属性强，适用于沙格列汀及其代谢产物5-羟基沙格列汀在大鼠体内的药动学研究。参考文献[1]BoultonDW.Clinicalpharmacokineticsandpharmacody-namicsofsaxagliptin，adipeptidylpeptidase-4inhibitor[J].ClinPharmacokinet，2017，56（

【参考文献】：
期刊论文
[1]沙格列汀联合二甲双胍治疗2型糖尿病的临床观察[J]. 刁幼林,于建华,王娟.  中国药房. 2015(27)
[2]2型糖尿病治疗新药沙格列汀的药理及临床评价[J]. 陆菊明.  中国新药杂志. 2011(21)



本文编号：3066831