基于NF-κB信号通路rNS1/2对甲型流感病毒诱导小鼠β防御素4产生的作用及其机制研究

发布时间：2021-03-06 10:32

　　目的运用基因工程方法获得重组甲型流感病毒H1N1非结构蛋白1（r NS1）和2（r NS2）,探讨r NS1和r NS2对小鼠呼吸道组织β防御素4产生的作用,以及其β防御素4基于NF-κB信号通路的作用机制。方法1、运用RT-PCR方法从甲型流感病毒株A/PR/8/34（H1N1）扩增NS1、NS2基因,构建原核表达质粒p ET22b（+）/NS1,p ET22b（+）/NS2,经酶切、PCR和基因测序鉴定正确后,转化大肠杆菌Rosetta-gami（2）,用IPTG诱导表达,经亲和层析、超滤获得重组蛋白,通过SDS-PAGE电泳和Western Blot分析鉴定重组蛋白的正确性;2、将BALB/c小鼠随机分为r NS1组（100μg/kg）、r NS1+病毒RNA组;r NS1+病毒组、RNA组（50μg/kg）、病毒组（0.2×LD50）、正常对照组、r NS2+病毒组、r NS2+病毒RNA组、r NS2组（100μg/kg）,共9组,每组6只,每组随机给3只小鼠提前12h腹腔注射PDTC（50mg/kg）,再将相应制剂通过滴鼻给予小鼠,24h后采用RT-PCR、HE染色、wes... 

【文章来源】：贵州医科大学贵州省

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

质粒pET22b(+)模式图

R 鉴定阳性克隆扩增后提取质粒，用 Apal 和 Xhol0bp、1500bp 大小的条带（图 1-4）。重组质1; 2: NS2; 3:阴性对照; M: DNAmarkerS1、NS2 成熟肽基因的 PCR 产物the PCR product of NS1、NS2 mature peptide.

1:pET22b(+)/NS1 ; 2and3:pET22b(+) ; 4:pET22b(+)/NS2;NA marker.-4 重组质粒 pET22b(+)/NS1、pET22b(+)/NS2 酶切鉴定 1-4 Identification of recombinant pET22b(+)/NS1、pET22b(+)/NS2注：1、NS1；2、NS2 M: DNAmarker图 1-5 重组质粒的 PCR 鉴定Fig.1-5 Identification of thepositive clone by the product of

【参考文献】：
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本文编号：3066941