幽门螺杆菌多价表位疫苗CWAE的表达及其免疫学性质的研究

发布时间：2021-03-29 22:19

　　目的:利用生物信息学软件评价幽门螺杆菌（Helicobacter pylori）多价表位疫苗CWAE的抗原结构,经原核表达获得高纯度CWAE蛋白,进而鉴定多价表位疫苗CWAE的免疫学性质。方法:通过生物信息学软件分析H. pylori多价表位疫苗CWAE的抗原结构;用人工合成的H. pylori多价表位肽融合基因WAE替换重组质粒pET28a-CUE中的UE基因,构建重组质粒pET28aCWAE。然后,将pET28a-CWAE转入大肠杆菌BL21（DE3）中,经IPTG诱导表达,并通过Ni-NTP镍离子亲和层析纯化抗原蛋白CWAE;利用GM1-ELISA鉴定CWAE中CTB组分的黏膜免疫佐剂活性。最后,通过ELISA和小鼠脾脏淋巴细胞增殖实验检测CWAE激发BALB/c小鼠产生抗H.pylori抗体体液免疫和淋巴细胞免疫应答的能力。结果:通过生物信息学软件证实H. pylori多价表位疫苗CWAE具有科学合理的结构;重组表达质粒pET28a-CWAE经PCR、双酶切和基因测序鉴定,融合基因CWAE与设计序列完全一致;重组基因工程菌株pET28a-CWAE/BL21（DE3）经IPTG诱... 

【文章来源】：中国生物工程杂志. 2019,39(12)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

CWAE疫苗的抗原结构和DNAstar分析

GM1-ELISA实验结果证实随CWAE和CTB蛋白浓度的降低，CWAE和CTB均与ELISA板包被的GM1结合量呈现下降趋势，说明CWAE和CTB均能够形成五聚体与神经节苷脂GM1结合，即CWAE中CTB组分具有较好的黏膜免疫佐剂活性(图4)。但是，与阳性对照CTB相比，CWAE中CTB组分的黏膜免疫佐剂活性还是有所下降，说明与CTB偶联的WAE组分依旧对CTB黏膜免疫佐剂活性有影响，使CTB组分形成五聚体能力下降。图3 CWAE抗原蛋白的表达和纯化

CWAE抗原蛋白的表达和纯化


本文编号：3108293