MHC I类分子递呈修饰后抗原的结构与免疫学研究

发布时间：2021-03-31 03:16

　　主要组织相容性抗原复合体（MHC）是一种存在于脊椎动物中的由一个庞大的基因家族编码的细胞表面分子,介导白细胞,也就是常说的免疫细胞与其它白细胞或体细胞间的相互作用,在机体细胞间识别和区分自已与异己中扮演重要角色。MHC分子作为表达于个体细胞表面的抗原递呈结构,影响着不同来源抗原的T细胞反应。因而,MHC在一定程度上决定了个体对于感染物抗原的免疫应答,这其中也涉及到对疾病的易感性和自身免疫反应的发生。在人类中,MHC又叫做人类白细胞抗原（HLA）。在细胞内,经过抗原加工和蛋白酶体降解途径产生的多肽作为T细胞表位,由MHCI类分子递呈给细胞毒性T细胞（CTLs）。该过程在效应细胞免疫中发挥着重要的作用。另一方面发生了各种翻译后修饰（PTMs）的真核蛋白能够产生一系列修饰的抗原,丰富了MHC相关多肽的类型,递呈于细胞表面成为T细胞受体（TCR）识别的潜在目标。已有研究表明,一些包含翻译后修饰（如甲酰化、脱酰胺化、糖基化、乙酰化、磷酸化和半胱氨酸化）的多肽可以与各自的非修饰类似物被T细胞特异性地区分开。在某种情况下,发生于感染、炎症、细胞转化、凋亡和衰老中的翻译后修饰往往带来新的MHC相关新抗... 

【文章来源】：中国科学技术大学安徽省 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：249 页

【学位级别】：博士

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摘要
ABSTRACT
第一章 绪论（文献综述）
    1.1 引言
    1.2 MHC分子结构免疫学概述
        1.2.1 MHC的概念
        1.2.2 MHC Ⅰ类分子相关抗原肽的加工呈递
        1.2.3 MHC及相关分子的结构特点
        1.2.4 MHC分子结构在T细胞免疫研究中的应用
    1.3 翻译后修饰抗原的MHC分子递呈
        1.3.1 翻译后修饰概述
        1.3.2 MHC相关抗原的翻译后修饰
        1.3.3 翻译后修饰在抗原识别及自身免疫中的影响
第二章 MHC Ⅰ类分子递呈N端乙酰化抗原机制研究
    2.1 引言
    2.2 实验材料与方法
        2.2.1 主要实验仪器
        2.2.2 主要商品试剂
        2.2.3 常用溶液及配制方法
        2.2.4 菌株和载体
        2.2.5 多肽合成
        2.2.6 引物设计与合成
*3901基因扩增及亚克隆构建">        2.2.7 HLA-B^*3901基因扩增及亚克隆构建
*3901和hβ₂m包涵体蛋白大量表达">        2.2.8 HLA-B^*3901和hβ₂m包涵体蛋白大量表达
        2.2.9 多肽与MHC Ⅰ类分子包涵体蛋白体外复性
        2.2.10 pMHC复合物的蛋白质纯化
        2.2.11 BCA protein assay kit检测蛋白质浓度
*3901复合物蛋白质结晶">        2.2.12 pHLA-B^*3901复合物蛋白质结晶
*3901复合物蛋白质晶体X-射线衍射和数据收集">        2.2.13 pHLA-B^*3901复合物蛋白质晶体X-射线衍射和数据收集
*3901复合物蛋白质结构解析、精修及分析">        2.2.14 pHLA-B^*3901复合物蛋白质结构解析、精修及分析
        2.2.15 pMHC复合物蛋白质热稳定性试验
    2.3 结果
*3901的构建">        2.3.1 表达载体pET-28b-HLA-B^*3901的构建
*3901蛋白试表达及包涵体纯化">        2.3.2 HLA-B^*3901蛋白试表达及包涵体纯化
*3901复合物体外复性及纯化">        2.3.3 pHLA-B^*3901复合物体外复性及纯化
*3901复合物蛋白质结晶及X-射线衍射数据收集">        2.3.4 pHLA-B^*3901复合物蛋白质结晶及X-射线衍射数据收集
*3901复合物蛋白质结构解析">        2.3.5 pHLA-B^*3901复合物蛋白质结构解析
*3901复合物结构分析">        2.3.6 N端乙酰化多肽与HLA-B^*3901复合物结构分析
        2.3.7 N端乙酰化对多肽结合稳定性的影响
        2.3.8 N端乙酰化对表位的T细胞免疫原性的影响
    2.4 小结与讨论
第三章 N端乙酰化流感病毒表位的T细胞免疫学研究
    3.1 引言
    3.2 实验材料与方法
        3.2.1 主要商品试剂
        3.2.2 常用溶液及配制方法
        3.2.3 血样的采集和处理
        3.2.4 HLA分型检测
        3.2.5 人外周血单个核细胞（PBMCs）分离
        3.2.6 细胞的冻存及复苏
        3.2.7 PBMCs体外刺激培养
+/CD8⁺细胞">        3.2.8 MACS技术磁珠分选CD4⁺/CD8⁺细胞
        3.2.9 ELISPOT操作过程（QuantoBio）
        3.2.10 pHLA复合物体外复性及纯化
    3.3 结果
        3.3.1 N端乙酰化T细胞表位预测
        3.3.2 N端乙酰化M1抗原表位T细胞免疫原性检测
        3.3.3 N端乙酰化流感病毒表位T细胞免疫水平调查
    3.4 讨论
第四章 MHC Ⅰ类分子递呈双磷酸化抗原机制研究
    4.1 引言
    4.2 实验材料与方法
        4.2.1 主要实验仪器、材料及试剂
        4.2.2 多肽合成
        4.2.3 主要实验方法
    4.3 结果
*2705复合物体外复性及纯化">        4.3.1 pHLA-B^*2705复合物体外复性及纯化
*2705复合物蛋白质结晶及X-射线衍射数据收集">        4.3.2 pHLA-B^*2705复合物蛋白质结晶及X-射线衍射数据收集
*2705复合物蛋白质结构解析">        4.3.3 pHLA-B^*2705复合物蛋白质结构解析
        4.3.4 HLA-B27限制性双磷酸化多肽递呈的结构基础
        4.3.5 磷酸基团对HLA-B27结合和稳定性的位点特异性影响
        4.3.6 磷酸基团修饰对抗原特性及TCR识别的影响
    4.4 小结与讨论
第五章 磷酸化表位T细胞免疫学及其T细胞受体研究
    5.1 引言
    5.2 实验材料与方法
        5.2.1 主要商品试剂
        5.2.2 常用溶液及配制方法
        5.2.3 多肽合成
        5.2.4 引物设计与合成
        5.2.5 免疫佐剂gp96 N333表达与纯化
        5.2.6 小鼠多肽免疫
        5.2.7 小鼠脾脏细胞分离
        5.2.8 ELISPOT操作过程（BD）
        5.2.9 小鼠脾细胞体外培养
        5.2.10 MHC Tetramer制备
        5.2.11 MHC Tetramer染色
6细胞）">        5.2.12 细胞总RNA提取（5～10×10⁶细胞）
        5.2.13 5’RACE扩增TCR序列
        5.2.14 5’RACE扩增TCR序列
    5.3 结果与讨论
        5.3.1 gp96 N333蛋白免疫佐剂的表达纯化
        5.3.2 磷酸化多肽对转基因鼠的T细胞免疫原性监测
        5.3.3 MHC四聚体染色分选磷酸化表位特异性T细胞
b转基因小鼠T细胞受体序列扩增">        5.3.4 HLA-A2.1/K^b转基因小鼠T细胞受体序列扩增
第六章 其它工作
    6.1 猪源病毒CTL表位多肽与SLA-1结合研究
        6.1.1 引言
        6.1.2 结果与讨论
        6.1.3 小结与展望
    6.2 HLA-A3超类型交叉递呈多肽的结构学研究
        6.2.1 引言
        6.2.2 结果和讨论
        6.2.3 小结与展望
参考文献
附录1 缩略词表
致谢
在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果



本文编号：3110677