miR-29a-5p在丙戊酸钠诱导海马神经干细胞向神经元分化过程中的作用

发布时间：2021-03-31 09:27

　　目的应用芯片技术和分子生物学技术研究在丙戊酸钠（Valproate,VPA）诱导海马神经干细胞（Neural stem cells,NSCs）向神经元分化过程中miR-29a-5p所起的作用。实验一:大鼠海马神经干细胞VPA处理后mRNAs和miRNAs差异表达谱的构建方法（1）分离培养大鼠胚胎海马NSCs,设置VPA浓度梯度0.3mM、0.6mM、1mM和3mM,用VPA和对照溶剂分别进行处理,免疫荧光检测细胞凋亡情况。（2）运用免疫荧光、蛋白质免疫印迹（Western blot）和细胞流式技术检测VPA在海马NSCs中的组蛋白乙酰化水平及在NSCs增殖和分化中的作用。（3）利用实时定量PCR检测关键的神经元特异分子—突触蛋白1（Synapsin I,Syn1）和微管相关蛋白2（Microtubule-associated protein 2,Map2）,在VPA处理后的动态表达,选择神经元特异分子表达开始显著增加的时间点收取芯片样本。（4）样本送生物芯片公司,构建mRNAs和miRNAs差异表达谱,得到差异倍数在1.5倍以上、P值小于0.05的mRNAs和miRNAs数据。（5）收... 

【文章来源】：南通大学江苏省

【文章页数】：100 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

鉴定大鼠海马NSCsA：神经球B：Nestin阳性细胞C：Ki67阳性细胞D：MAP2

理后 NSCs 凋亡情况optosis of NSCs after VPA treatment组蛋白乙酰化水平的影响定 VPA 处理后组蛋白乙酰化水平是否发生变化，我们进行检测。免疫荧光显示，分化 7d 后，与对照组相比，显增加（图 3A）。此外，Western blot 结果也显示 VPA 明显的上调（图 3B、C），差异具有统计学意义(P <0.00

4乙酰化表达变化 A：acH4阳性细胞 B：H4和acH4的蛋白质表达 C： VPA 组中 acH4 蛋白水平上调，*** P <0.0013 Changes in expression of H4 acetylation A: acH4 positive cells B: The exnd acH4 protein C: Statistical analysis showed that the increasing level of acH4 Group, *** P <0.001PA 对 NSCs 增殖的影响了探究 VPA 对 NSCs 增殖的影响，本实验用细胞免疫荧光进行检l/LVPA 处理 NSCs 24h 后，EdU 增殖实验结果显示阳性细胞数量与著减少（图 4A、C）（P<0.001），同时 Ki67 细胞免疫荧光显示 VPA胞数量明显减少（图 4B、D）（P<0.01）。因此我们认为 VPA 可抑。

【参考文献】：
期刊论文
[1]穹窿海马伞切割后海马内NSCs的增殖和向神经元的分化[J]. 邹琳清,金国华,董传明,秦建兵,田美玲,张新化,朱蕙霞.  苏州大学学报(医学版). 2007(05)



本文编号：3111202