真核重组质粒pEGFP-FcγRIIb的构建及其在BALB/c小鼠体内的表达

发布时间：2021-04-05 21:07

　　目的本研究旨在构建人FcγRIIb基因的真核表达重组质粒pEGFP-FcγRIIb,并检测其在真核细胞NIH3T3及BALB/c小鼠体内的表达,为后续的体内研究奠定基础。方法提取U937细胞的总RNA,采用RT-PCR法扩增人FcγRIIb基因编码区片段。用限制性内切酶HindⅢ和SmaⅠ双酶切空质粒pEGFP-C1获得线性化质粒。将扩增出的目的片段与线性质粒pEGFP-C1连接,构建重组表达质粒pEGFP-FcγRIIb,经PCR、限制性核酸内切酶酶切及DNA测序鉴定后,采用脂质体法将重组表达质粒pEGFP-FcγRIIb转染到真核细胞NIH3T3中,同时设空质粒pEGFP-C1和细胞对照组,用荧光显微镜观察细胞瞬时表达。经G418筛选3W,荧光显微镜下观察阳性细胞约为80%时,提取细胞的总蛋白,用Western blot方法进一步鉴定人的FcγRIIB的表达情况。将重组质粒pEGFP-FcγRIIb注射到BALB/c小鼠肌肉中,并设空质粒pEGFP-C1和PBS对照组。三组小鼠分别注射pEGFP-FcγRIIb（50μg）、pEGFP-C1（50μg）及PBS（50μL）,2w后以... 

【文章来源】：宁夏医科大学宁夏回族自治区

【文章页数】：81 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

质粒pEGFP-C1的物理图谱

FcγRIIb基因PCR扩增产物电泳结果

pEGFP-FcγRIIb正向测序的结果

【参考文献】：
期刊论文
[1]FcγRⅡ b调控浆细胞的存活和凋亡[J]. 王勇.  国际免疫学杂志. 2007 (05)

硕士论文
[1]FcγRⅡB在重症肌无力中的表达及其与抗AChR抗体的关系[D]. 翦爱.中南大学 2009



本文编号：3120104