小鼠精原干细胞体外培养体系建立与功能鉴定

发布时间：2021-05-11 17:04

　　目的构建小鼠精原干细胞（SSCs）体外培养体系,并对培养的SSCs进行功能鉴定。方法采用两步酶法消化小鼠睾丸组织制备单细胞悬液,CD90、CD49f免疫磁珠分选SSCs,采用Sertoli细胞共培养方法体外培养SSCs,并将培养的SSCs移植到受体小鼠曲细精管,定期观察移植后SSCs在受体小鼠曲细精管增殖分化情况。结果本次研究培养的SSCs在体外大量增殖,SSCs标记物检测显示,CD90、CD49f未分化SSCs标记物表达阳性率均>99%,而CD117分化SSCs标记物表达阳性率<1%,SSCs转染GFP慢病毒后移植到受体小鼠曲细精管内可以广泛定植并增殖分化,移植后12w在受体小鼠曲细精管内可见GFP⁺精子细胞。结论本研究中建立的小鼠SSCs体外培养体系,不仅能够促进SSCs大量增殖,同时保持了其未分化SSCs干细胞特性。 

【文章来源】：中国性科学. 2019,28(11)

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 实验动物
    1.2 培养方法
        1.2.1 Sertoli细胞培养液
        1.2.2 SSCs培养液
        1.2.3 睾丸细胞分离
        1.2.4 睾丸Sertoli细胞分离纯化
        1.2.5 免疫磁珠SSCs分离纯化
        1.2.6 SSCs/Sertoli细胞共培养
        1.2.7 SSCs细胞体外培养
        1.2.8 SSCs移植受体建立和SSCs移植
2 结果
    2.1 Sertoli细胞培养
    2.2 SSCs/ Sertoli细胞共培养
    2.3 SSCs细胞体外培养
    2.4 SSCs标记物检测
    2.5 流式细胞仪SSCs标记物检测
    2.6 SSCs异体移植
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]山羊精原干细胞的鉴定及培养体系优化的研究[J]. 张钦恺,姜颖,王明明,董焕声,尉玉杰,潘庆杰.  中国细胞生物学学报. 2016(07)
[2]BALB/c小鼠精原干细胞体外长期培养和鉴定[J]. 申复进,张茨,杨嗣星,熊云鹤,廖文彪,杜贤进,王玲珑.  中华男科学杂志. 2008(11)
[3]精原细胞异基因移植研究进展及其面临的困惑[J]. 马良宏,丁强,王翔.  中华男科学杂志. 2006(03)



本文编号：3181779