骨髓间充质干细胞和脂肪间充质干细胞在不同比例下混合培养后成骨分化能力的研究

发布时间：2017-04-20 14:23

  本文关键词：骨髓间充质干细胞和脂肪间充质干细胞在不同比例下混合培养后成骨分化能力的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:本实验的目的是研究探讨骨髓间充质干细胞(BMSC)与脂肪间充质干细胞(ADSC)在不同比例下混合共培养后对干细胞成骨能力的影响。方法:利用贴壁筛选法和酶消化法从大鼠身上分离提纯分别获得脂肪间充质干细胞和骨髓间充质干细胞。在体外培养的环境下对这两种干细胞分别进行成软骨、成骨、成脂肪诱导分化。使用甲苯胺蓝试剂对成软骨诱导组进行鉴定;成骨分化组用茜素红染色鉴定;而成脂肪组则用油红O染色鉴定。之后将成骨诱导组分为6组。A组:未诱导分化的干细胞空白对照组;B组:骨髓间充质干细胞成骨诱导组;C组:脂肪间充质干细胞成骨诱导组;D组:BMSC与ADSC混合诱导组,BMSC与ADSC的细胞比例为1:3;E组:BMSC与ADSC细胞比例为1:1的混合诱导组;F组:BMSC与ADSC细胞比例为3:1的混合诱导组。六组的细胞密度均采取1.0×104/cm2种植。以上六组细胞均采用Western-Blot技术检测RUNX2和OCN等蛋白。体内实验随机挑选不同性别的路易斯大鼠三十五只,分实验组和空白对照组,将所有大鼠都造出颅骨缺损模型。空白对照组植入空白的生物学支架材料,实验组先将上述六组细胞植入生物学支架材料,再植入颅骨缺损处。六周后将材料取出进行茜素红染色观察钙化灶情况,并采用DR射片对大鼠颅骨恢复情况进行分析。结果:ADSC和BMSC两种细胞在成软骨诱导条件下细胞进行成软骨分化,甲苯胺蓝染色可见蓝色;成骨诱导分化条件下细胞成骨分化,茜素红染色可见片状红色;成脂诱导条件下诱导成为脂肪细胞,油红O染色可见红色。在成骨诱导分化的六组中,BCDEF各组细胞中的OCN和RUNX2蛋白表达水平显著高于A组细胞(P0.05);B组细胞中的蛋白表达高于C组(P0.05);DEF组细胞中的蛋白表达较B、C组显著性升高(P0.01);DEF三组中,蛋白表达量的顺序依次为FED。体内实验的情况为六周后将植入材料和颅骨取出后发现:茜素红染色下实验组均有钙化灶形成,且钙化灶的多寡为混合组单独诱导组未诱导组,DR射片情况不佳(详见后边分析讨论)。结论:混合共培养后,两种细胞的成骨能力有所增强。成骨细胞植入支架材料后放入骨缺损模型大鼠体内,可促进骨愈合,混合诱导的细胞成骨能力较单独诱导的强,且混合培养中骨髓间充质干细胞含量多的组成骨能力较好。
【关键词】：脂肪间充质干细胞 骨髓间充质干细胞 混合共培养 茜素红 Ⅱ型胶原
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 中英文缩略词对照表5-7
• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-15
• 参考文献12-15
• 实验方法与实验材料（资料与内容）15-34
• 1 实验内容15
• 2 实验动物、耗材和仪器15-19
• 3 实验方法：原代细胞的提取与培养19-22
• 4 间充质干细胞的诱导分化22-24
• 5 细胞染色的实验方法24-25
• 6 Western-blot的检测技术25-32
• 7 相关体内实验32-34
• 结果34-39
• 讨论39-43
• 结论43-44
• 参考文献44-45
• 综述 脂肪间充质干细胞在组织工程学和临床应用方面的研究进展45-59
• 参考文献55-59
• 作者简介及读研期间主要科研成果59-60
• 致谢60

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