烟酰胺磷酸核糖转移酶（Nampt）在大鼠骨髓间充质干细胞复制性衰老中的表达及意义

发布时间：2017-04-21 06:42

  本文关键词：烟酰胺磷酸核糖转移酶（Nampt）在大鼠骨髓间充质干细胞复制性衰老中的表达及意义，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：间充质干细胞（MSCs）体外复制性衰老将造成组织工程的基础研究和未来的产业化研究中种子细胞的不足，严重影响其在组织、器官再生和修复中的应用，这是干细胞研究领域中重大的科学问题。随着以NAD+为中心的哺乳动物衰老理论的提出，烟酰胺磷酸核糖转移酶（Nampt）逐渐成为人们研究的焦点。Nampt是NAD+生物合成的关键限速酶，决定代谢中NAD+水平，而某些抗衰老蛋白的活性，如沉默信息调控因子Sirtuins，则严格受控于NAD+浓度。以往关于Nampt与细胞衰老关系的研究多集中于体细胞。Nampt可能是一种延缓人类体细胞衰老的因子。结合我们前期实验，体外连续传代培养使MSCs生长减慢；衰老个体MSCs中Nampt表达降低。我们推测，在干细胞衰老过程中，Nampt可能发挥调控作用。 本研究以大鼠骨髓间充质干细胞（rBMSCs）为研究对象，利用体外连续传代培养法建立rBMSCs复制性衰老模型，并通过观察细胞形态学变化，分析细胞周期，检测衰老相关-半乳糖苷酶（SA-β-gal）活性及衰老相关因子表达等，对模型进行系统评估；应用qRT-PCR、Western blot和细胞免疫荧光，检测Nampt在rBMSCs复制性衰老模型中的表达。 所得结果如下： 1.成功从大鼠骨髓中分离培养出rBMSCs，rBMSCs表达间充质干细胞标记物CD44、CD90和CD105，而不表达内皮标记物CD31和白细胞标记物CD45，并具有成骨、成脂分化潜能。 2.成功建立rBMSCs体外复制性衰老模型。随着传代培养次数的增加，，rBMSCs形态出现衰老样的改变，细胞长宽比减小，细胞面积增大；细胞生长增殖速度减慢，细胞群体倍增时间延长；细胞周期发生阻滞，G0/G1期细胞增多，而S期细胞减少；rBMSCs成骨和成脂能力降低；衰老相关SA-β-gal活性增强；衰老相关因子p16INK4a表达增加。 3. Nampt表达于rBMSCs；在rBMSCs体外复制性衰老模型中，随着传代培养时间的延长，无论在mRNA水平上，还是在蛋白水平上，Nampt表达均逐渐降低，呈时间依赖性。 综上所述，Nampt在rBMSCs体外复制性衰老过程中表达下调，Nampt可能对rBMSCs复制性衰老具有调控作用。本研究既为阐明干细胞衰老的分子机制，又为维持干细胞数量及功能，满足种子细胞需求以及延缓干细胞衰老提供重要的理论和实验基础。
【关键词】：烟酰胺磷酸核糖转移酶 间充质干细胞 衰老
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R339.38
【目录】：

• 前言4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-11
• 英文缩略词表11-12
• 第1章 文献综述12-19
• 1.1 细胞衰老12-13
• 1.1.1 细胞衰老的类型12
• 1.1.2 细胞衰老的特征12-13
• 1.2 干细胞衰老13-16
• 1.2.1 干细胞衰老的机制13-14
• 1.2.2 间充质干细胞衰老14-16
• 1.3 抗细胞衰老16
• 1.4 烟酰胺磷酸核糖转移酶（Nampt）16-19
• 1.4.1 Nampt 概述16-17
• 1.4.2 Nampt 与老龄化疾病17-18
• 1.4.3 Nampt 和细胞衰老18-19
• 第2章 实验研究19-45
• 第1节 rBMSCs 的分离培养与鉴定19-27
• 1 实验材料19-20
• 2 实验方法20-24
• 3 实验结果24-27
• 第2节 rBMSCs 体外复制性衰老模型的建立与评估27-38
• 1 实验材料27
• 2 实验方法27-31
• 3 实验结果31-38
• 第3节 Nampt 在 rBMSCs 体外复制性衰老模型中的表达及意义38-45
• 1 实验材料39-41
• 2 实验方法41-42
• 2.1 Nampt 在 rBMSCs 中的表达41-42
• 2.2 在 rBMSCs 体外复制性衰老模型中 Nampt 的表达变化42
• 3 实验结果42-45
• 第3章 讨论45-49
• 3.1 rBMSCs 的分离培养与鉴定45
• 3.2 体外 rBMSCs 复制性衰老模型的建立及评估45-48
• 3.3 Nampt 在 rBMSCs 复制性衰老模型中的表达及意义48-49
• 第4章 结论49-50
• 参考文献50-56
• 作者简介及在校期间所获科研成果56-57
• 作者简介56
• 科研成果56-57
• 致谢57

【共引文献】

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本文编号：319736