CCT-ODN对配体诱导的TLR7/9细胞内移行的抑制作用及可能机理
发布时间：2021-07-03 00:12
Toll样受体（Toll-like receptor，TLRs）是固有免疫系统中能识别病原体相关分子模式的模式识别受体（PRR）之一，在识别病原微生物高度保守的结构分子中起到很关键的作用。每种TLRs能识别不同的微生物分子，其中能识别核酸的包括：TLR3，7，8和9，而且自身核酸也保留了活化TLRs信号的能力。当免疫细胞接受到不当刺激时，会引发自身免疫性疾病。当细胞处于稳定状态时，大多数TLR7/9表达在内质网中，当细胞受到病毒侵袭时，内质网中的多跨膜蛋白Unc93B1负责将TLR7/9从内质网转移到内体中，在内体中分裂成有活性的受体，与配体结合，启动下游信号通路。CCT-ODN是一种模拟人类微卫星DNA的含有8个CCT重复单位的脱氧寡核苷酸（ODN），前期工作表明：该ODN是一种抑制性ODN，对TLRs的抑制作用具有选择性，表现为不抑制TLR3和TLR4的活性，对TLR9的抑制能力强于TLR7，然而，CCT-ODN是如何抑制TLR7/9的活性尚不清楚。有文献报道：位于内质网上的多跨膜蛋白Unc93B1对TLR7和TLR9的运输具有选择性，野生型的Unc93B1优先运输TLR9，而D3...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：147 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
不同浓度的B型CpGODN（CpG2006）和/或CCT-ODN对小鼠脾细胞中TLR9胞内运输的影响
B，C 三种型别的 CpG ODN 对 TLR9 细胞内移行的影响Fig 1.2 Effect of A, B and C type CpG ODN on the intracellular trafficking ofTLR9 in CAL-1 cellsCAL-1 cells were cultured in DMEM/10% FBS containing 2μg/ml A-, B-,C-type CpG ODN (CpG2216, CpG2006, C274), 8μg/ml CCT-ODN andCpG2006+CCT-ODN (2μg/ml+8μg/ml) for 2 hours and then fixed on slides. Theslides were stained with polyclonal antibodies against Calnexin, an ER-specificprotein, or TLR9 followed by secondary antibodies labeled with Alexa Fluor-488(green color, for Calnexin) or Alexa Fluor-555 (red color, for TLR9), and thendetected under the confocal microscope (1800 )（4）通过 TLR9 配体剂量来确定该实验中 CCT-ODN 作用于 CAL-1 细胞的时效和量效参数。在研究中需要选择合适剂量的刺激剂和 CCT-ODN，在研究CCT-ODN 对 TLR7/9 运输的影响时，需要确定其合适用量。小鼠脾细胞是一种
第二篇 研究内容恰当的刺激剂剂量，该剂量须满足的条件是：1）具备诱导 TLR9 从内质网中运出的能力；2）刺激能力不能过大，以免掩盖抑制剂的原本能力。尝试刺激剂剂量相对较小时，具体情况如何？首先选择 1 μg/ml，从结果中可以看出 CpG2006的剂量为 1μg/ml 时，足以诱导 TLR9 从内质网中运出，为避免刺激剂对 TLR9的诱导能力过强，致使 CCT-ODN 无法抑制强度过大的刺激剂诱导的移行。综合考虑选择刺激剂剂量为 1μg/ml，之前的研究表明：当抑制剂 CCT-ODN 的剂量为8μg/ml 时，抑制能力最强，CCT-ODN 也是一种 ODN，剂量太大可能会起到刺激剂的作用，尝试选择相对剂量较小的 6μg/ml，发现 6μg/ml 也有抑制能力。但为保证研究平台稳定，选择 CpG2006 剂量为 1μg/ml，CCT-ODN 剂量为 8μg/ml（见图 1.3）。
本文编号：3261458
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：147 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
不同浓度的B型CpGODN（CpG2006）和/或CCT-ODN对小鼠脾细胞中TLR9胞内运输的影响
B，C 三种型别的 CpG ODN 对 TLR9 细胞内移行的影响Fig 1.2 Effect of A, B and C type CpG ODN on the intracellular trafficking ofTLR9 in CAL-1 cellsCAL-1 cells were cultured in DMEM/10% FBS containing 2μg/ml A-, B-,C-type CpG ODN (CpG2216, CpG2006, C274), 8μg/ml CCT-ODN andCpG2006+CCT-ODN (2μg/ml+8μg/ml) for 2 hours and then fixed on slides. Theslides were stained with polyclonal antibodies against Calnexin, an ER-specificprotein, or TLR9 followed by secondary antibodies labeled with Alexa Fluor-488(green color, for Calnexin) or Alexa Fluor-555 (red color, for TLR9), and thendetected under the confocal microscope (1800 )（4）通过 TLR9 配体剂量来确定该实验中 CCT-ODN 作用于 CAL-1 细胞的时效和量效参数。在研究中需要选择合适剂量的刺激剂和 CCT-ODN，在研究CCT-ODN 对 TLR7/9 运输的影响时，需要确定其合适用量。小鼠脾细胞是一种
第二篇 研究内容恰当的刺激剂剂量，该剂量须满足的条件是：1）具备诱导 TLR9 从内质网中运出的能力；2）刺激能力不能过大，以免掩盖抑制剂的原本能力。尝试刺激剂剂量相对较小时，具体情况如何？首先选择 1 μg/ml，从结果中可以看出 CpG2006的剂量为 1μg/ml 时，足以诱导 TLR9 从内质网中运出，为避免刺激剂对 TLR9的诱导能力过强，致使 CCT-ODN 无法抑制强度过大的刺激剂诱导的移行。综合考虑选择刺激剂剂量为 1μg/ml，之前的研究表明：当抑制剂 CCT-ODN 的剂量为8μg/ml 时，抑制能力最强，CCT-ODN 也是一种 ODN，剂量太大可能会起到刺激剂的作用，尝试选择相对剂量较小的 6μg/ml，发现 6μg/ml 也有抑制能力。但为保证研究平台稳定，选择 CpG2006 剂量为 1μg/ml，CCT-ODN 剂量为 8μg/ml（见图 1.3）。
本文编号：3261458
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