agrB/D/C对Agr系统活性及金黄色葡萄球菌毒力的影响

发布时间：2021-07-28 12:44

　　目的:构建金黄色葡萄球菌（金葡菌）ΔagrB/D/C/Newman敲除株,分析agrB/D/C对Agr系统活性及金葡菌毒力的影响,为深入研究不同型别Agr系统对金黄色葡萄球菌的致病作用提供依据.方法:利用同源重组技术,以pBT2为敲除载体,构建ΔagrB/D/C/Newman敲除株,检测野生株和敲除株的溶血能力,色素形成能力,生物膜形成能力及毒力基因表达.结果:成功构建了ΔagrB/D/C/Newman敲除株,与野生株Newman相比,敲除株溶血能力显著降低,色素形成能力显著降低,生物膜形成能力显著增加;敲除株培养上清中的蛋白种类和数量较野生株显著减少;实时荧光定量PCR（RT-PCR）结果显示ΔagrB/D/C/Newman敲除株毒力因子的转录水平较野生株显著降低.结论:agrB/D/C能够影响AgrA的表达从而影响Agr系统的功能,agrB/D/C基因敲除后显著改变毒力因子的表达水平. 

【文章来源】：暨南大学学报(自然科学与医学版). 2019,40(06)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

ΔagrB/D/C/Newman敲除株的PCR鉴定

对野生株以及敲除株的溶血活性、色素、生物膜形成能力等生物学特性进行分析,结果表明,ΔagrB/D/C/Newman敲除株的溶血活性显著低于野生株(图2A);过夜培养Newman野生株与敲除株,与野生株Newman相比,ΔagrB/D/C/Newman敲除株色素形成能力减弱,形成灰白色的菌落(图2B).用结晶紫染色法测定野生株与敲除株生物膜形成能力,结果显示,ΔagrB/D/C/Newman敲除株的生物膜形成能力显著高于野生株(图2C).2.3 ΔagrB/D/C/Newman敲除株培养上清蛋白

37 ℃ 过夜培养金葡菌Newman野生株和ΔagrB/D/C/Newman敲除株次日按1∶100体积比转种新鲜TSB培养基培养18 h,离心收集培养上清,TCA法沉淀上清蛋白,而后经质量分数为10% 的SDS-PAGE电泳,考马斯亮蓝染色.结果显示:Δagr B/D/C/Newman敲除株与野生株培养上清的蛋白表达谱有显著差异.与Newman野生株相比,agrB/D/C的敲除可导致多个分泌蛋白表达水平明显降低(图3),同时也会导致部分蛋白表达上升,这可能与 Agr 系统活性降低有关.将野生株和Δagr B/D/C敲除株差异蛋白条带进行质谱分析,结果显示 ΔagrB/D/C敲除株上清蛋白与野生株蛋白差异最大的几条主要条带分别为α-溶血素(alpha-hemolysin,hla)相对分子量为41.00;γ-溶血素(gamma-hemolysin, hlgB)相对分子量为35.00;酚溶调蛋白(phenol-soluble modulin,psm)相对分子量为44.00; 丝氨酸氨酸蛋白酶(staphylococcal serine proteinase A,sspa)相对分子量为25.00等(表2),表明金葡菌的这些毒力因子的表达主要受 Agr 系统调控.2.4 qRT-PCR测定毒力因子转录水平

【参考文献】：
期刊论文
[1]重庆西南医院骨科感染金黄色葡萄球菌的分子分型及耐药性研究[J]. 王轶男,凤梓涵,徐磊,姜北,黎庶,傅景曙,谢肇,王海连,胡晓梅.  暨南大学学报(自然科学与医学版). 2016(06)
[2]saeRS对金黄色葡萄球菌临床分离株的hla和lukS-PV表达的影响[J]. 屠金晶,张协,许园园,尚永朋,楼丹萍,武有聪,瞿涤,王良兴,余方友.  中华微生物学和免疫学杂志. 2013 (02)

硕士论文
[1]柠檬酸循环调节金黄色葡萄球菌金黄色素的产生[D]. 李晗.第二军医大学 2012



本文编号：3307941