嵌合诺如病毒P粒子疫苗诱导HIV-1广泛中和抗体的研究及qPCR技术检测三价流感减毒活疫苗病毒滴度方法的建立

发布时间：2021-07-30 19:25

　　由人类免疫缺陷病毒（HIV）导致的获得性免疫缺陷综合症（AIDS）是人类健康的头号威胁，但自HIV分离以来，始终未能成功研制出一种有效地HIV疫苗。在本论文研究中，首次尝试以诺如病毒P粒子作为gp41近膜端外侧区（MPER）广泛中和抗体表位的载体，通过P粒子的结构束缚，递呈相关抗原并诱导机体产生MPER特异性体液免疫应答。研究结果表明，HIV嵌合P粒子疫苗能够诱导豚鼠产生的MPER特异性的血清抗体，并具有明显的结合活性，然而中和活性微弱。利用HIV嵌合减毒流感活疫苗加强免疫后，未能提高HIV嵌合P粒子疫苗的免疫应答水平。虽然未能克服MPER特异性中和抗体诱导的屏障，但不能否定诺如P粒子展示平台在疫苗中的应用潜能。另一方面，流感病毒滴度的传统检测方法稳定性差，给免疫原的定量带来很大影响，有效感染剂量的确定最终又影响着疫苗的有效性。因此，本论文利用qPCR技术，建立检测三价流感减毒活疫苗病毒滴度的方法，大大缩短了病毒滴定所需的时间，并且克服了传统方法中检测结果不稳定等问题。1.嵌合诺如病毒P粒子疫苗诱导HIV-1广泛中和抗体的研究自HIV发现以来，全球的科学家们大大投入到HIV疫苗研发的科... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：105 页

【学位级别】：博士

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中文摘要
Abstract
缩略语表
第一章 嵌合诺如病毒 P 粒子疫苗诱导 HIV-1 广泛中和抗体的研究
    第一节 背景知识
        1. HIV 背景介绍
        2. NoV 背景介绍
        3. 立题依据及论文设计思路
    第二节 实验材料
        1. 质粒、HIV-1 假病毒、菌株及细胞系
        2. 实验动物
        3. 主要试剂
        4. 主要溶液
        5. 构建引物
        6. 分支肽序列
        7. 主要仪器
    第三节 实验方法
        1. 嵌合蛋白的同源模拟
        2. NoV-PP 及 NoV-PP-HIV 嵌合质粒构建
        3. 蛋白表达及纯化
        4. LAIV-HIV 疫苗的制备
        5. 免疫实验及评价方法
        6. 统计学方法
    第四节 实验结果与讨论
        1. 嵌合蛋白的同源模拟
        2. NoV-PP-HIV 嵌合质粒构建
        3. 蛋白表达及纯化
    小结
第二章 QPCR 法检测三价流感减毒活疫苗病毒滴度方法的建立
    第一节 背景知识
        1. 流感病毒背景介绍
        2. 实时定量 PCR 技术
        3. 立题依据及论文设计思路
    第二节 实验材料
        1. 疫苗毒株、细胞系及鸡胚
        2. 主要试剂
        3. 主要溶液
        4. 构建所需引物
        5. 主要仪器
    第三节 实验方法
        1. RT-qPCR 检测方法
        2. 关键收获时间的确定
        3. 半数鸡胚感染剂量分析（EID50）
        4. 统计学分析
    第四节 实验结果与讨论
        1. RT-qPCR 的特异性和有效性
        2. 关键收获时间的确定
        3. RT-qPCR 的准确性和可重复性
        4. RT-qPCR 检测方法的可行性评价
    小结
结论
参考文献
作者简历
致谢



本文编号：3311985