单纯疱疹病毒I型（HSV-1）基因修饰突变株M3与突变株M5感染特性的分析

发布时间：2021-07-30 12:29

　　单纯疱疹病毒I型（herpes simplex virus I,HSV-1）作为引起人类疱疹性疾病的主要病原体,在人类中广泛传播并频繁地从潜伏状态再活化从而引起疾病,在不同年龄段人群中均具有较高的感染率。HSV-1在人群中通常引起口唇疱疹、角膜疱疹、疱疹性脑炎以及生殖器疱疹等疾病。长期以来,针对该病原的预防和治疗的相关研究不断深入,已经使得部分药物如阿昔洛韦及其衍生物等在临床中广泛应用。但是,目前还没有有效的疫苗用来预防单纯疱疹病毒感染。减毒活疫苗一直以来被视为能抵抗病毒病原的有效选择,主要是因为减毒株能诱发较好的免疫保护效应。在前期的工作中,本科室研究人员利用CRISPR/Cas9系统分别构建了单纯疱疹病毒I型（Herpes simplex virus,HSV-1）基因修饰减毒株M3和M5,M3减毒株是通过对HSV-1毒力因子UL7、免疫调控相关蛋白Vhs（UL41）和潜伏相关转录本LAT基因进行顺次缺失突变而获得的。在M3的基础上,我们继续完成了 US3和US5基因的缺失突变修饰,获得了减毒株M5。US3和US5基因均在细胞毒性T细胞（Cytotoxic T cell,CTL）诱导... 

【文章来源】：昆明医科大学云南省

【文章页数】：79 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１?ＨＳＶ－１病毒颗粒的基本结构模式（ａ）和基因组结构（ｂ）

ＵＳ３和ＵＳ５基因的缺失修饰可以在病毒增殖过程中稳定传代，同时，??针对突变株Ｍ４和Ｍ５所做的体外增殖分析结果也表明，在人二倍体细胞中，与??野生型毒株相比，两个毒株均呈现出与Ｍ３类似的低增殖特性（图７）。这些结??果也提示ＵＳ３和ＵＳ５基因的突变并不会影响ＨＳＶ１的增殖能力。??Ｍ０Ｉ＝０＿１??？?ＷＴ??８，?＋?Ｍ３??〇?°?０＾?＋?Ｍ４??Ｑ?６－?Ｍ５??２－??０?１?Ｉ?Ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ??８?１６?２４?３２?４０?４８??Ｈｏｕｒｓ?ｐｏｓｔ?ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ??图７减毒株与野生型毒株在细胞水平的增殖速率比较??２．２?ＨＳＶ－１突变株Ｍ４和Ｍ５在体外和抑制细胞凋亡的情况??大量研究已经表明，ＵＳ３和ＵＳ５基因主要通过抑制ＣＴＬ诱导的细胞凋亡效??应而参与病毒的免疫逃逸过程。然而，ＨＳＶ－１编码多种蛋白调控抑制细胞凋亡作??用，单一敲除某个基因虽然可以在一定程度上解除细胞凋亡抑制作用，但是这种??４９??

不会产生任何明显可见的临床症状，也不会导致小鼠出现死亡情况。??Ｍ５免疫小鼠免疫接种的第１到第１２天，未出现任何异常，其体重仍正常均衡??增加（图８Ａ），而动物的生存率和临床症状可直接反应出ＨＳＶ－１毒株的毒力强??弱以及安全性的高低。这个结果初步证明了?Ｍ５具有减毒特性，而且不会威胁动??物的生存安全。??Ｏ?Ｑ??２５．?令Ｍ５免疫组??＋?Ｍ５??－ｅ－?ＰＢＳｍ?＋?ＰＢＳ??２０－?８０－??ｅ?〇?Ｂ?露?Ｍ??哆?１〇＿?４０－??５－?２０－??〇？?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?〇－?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ??０２４６８?１０?１２?０２４６８?１０??免疫天数?免疫天数??图８?Ｍ５和ＰＢＳ免疫后小鼠的体重（Ａ）变化及生存率（Ｂ）??２．４?ＨＳＶ－１突变株Ｍ５免疫的小鼠感染野生型毒株后的临床症状观察??在Ｍ５通过滴鼻方式免疫小鼠后，分别在免疫后的第２８天和第５６天对试验??５０??


本文编号：3311405