BCG免疫小鼠血清特异性抗体与脾脏免疫相关基因表达的相关性研究

发布时间：2017-04-28 20:07

  本文关键词：BCG免疫小鼠血清特异性抗体与脾脏免疫相关基因表达的相关性研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:接种卡介苗(Bacillus Calmettee-Guerin,BCG)是人类预防结核病(tuberculosis,TB)的主要手段之一。BCG是世界上唯一一种得到许可的结核病疫苗,然而近些年,它的多种弊端正逐渐显现。因此,人们需要深入了解BCG诱导机体产生免疫效应的机制,这样才能在此基础上研发更为有效的新型结核疫苗。本研究在以BCG免疫小鼠后,观察不同时间点的血清特异性抗体效价、脾脏免疫相关细胞因子表达以及脾脏免疫相关受体分布情况,分析其变化规律及相关性,为探究BCG的免疫机制及研发新型结核疫苗奠定基础。方法:利用BCG免疫小鼠,采集不同时间点的外周血和脾脏样本。应用间接ELISA方法检测血清中特异性抗体效价,实时荧光定量PCR方法检测脾脏中免疫相关细胞因子IL-2、IL-10、IL-4、IL-12、IFN-γ的表达水平,直接免疫荧光组化方法检测脾脏中免疫相关受体TLR2、TLR9的表达分布情况。结果:BCG免疫小鼠后,成功检测到血清中特异性抗体水平随着时间延续呈现一种缓慢上升-明显上升-缓慢上升-明显上升的趋势,而总体呈上升趋势,证实BCG可以诱导机体产生体液免疫。成功检测到脾脏中IL-2、IL-10、IL-4、IL-12、IFN-γ的表达量发生不同程度的变化,IL-2,INF-γ两种Th1型细胞因子的表达水平在接种后期显著升高,而Th1型细胞因子IL-4的表达水平却发生明显下降。脾脏中的TLR2受体在BCG免疫小鼠的前期阶段表达显著上升,在免疫的后期则下降为普通表达水平。TLR9受体则在BCG免疫小鼠的中期阶段表达显著上升,而在免疫的后期会下降为普通表达水平。结论:在BCG诱导机体产生免疫效应的过程中,机体内的血清特异性抗体、免疫相关细胞因子和免疫相关受体之间存在着相互联系。在免疫的后期,机体中Th1型细胞因子和体液免疫效应呈正相关,而一些Th2型细胞因子则与体液免疫效应呈负相关性。
【关键词】：卡介苗免疫 特异性抗体 免疫相关细胞因子 免疫相关受体 相关性
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R392
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-8
• 前言8-9
• 第一篇 文献综述9-22
• 第一章 结核病及其疫苗研究进展9-16
• 1.1 结核病9-10
• 1.2 机体抗结核免疫的分子机制10-13
• 1.2.1 固有免疫10-11
• 1.2.2 适应性免疫11-13
• 1.3 结核病疫苗13-16
• 1.3.1 BCG/卡介苗13-14
• 1.3.2 重组活疫苗14
• 1.3.3 亚单位疫苗14
• 1.3.4 病毒载体疫苗14-15
• 1.3.5 DNA疫苗15-16
• 第二章 系统疫苗学在疫苗效能评价中的应用16-22
• 2.1 系统疫苗学概念的由来16-17
• 2.2 系统疫苗学与传统疫苗学的不同点17-18
• 2.2.1 研究思路不同17
• 2.2.2 研究对象不同17
• 2.2.3 研究重点不同17-18
• 2.2.4 研究的手段不同18
• 2.3 系统疫苗学与疫苗效能评价18-20
• 2.3.1 在黄热病疫苗效能评价中的应用18-19
• 2.3.2 在艾滋病疫苗中的应用19
• 2.3.3 在其他疫苗研究中的应用19-20
• 2.4 系统疫苗学用于疫苗效能评价存在的问题及其展望20-21
• 2.5 研究的目的和意义21-22
• 第二篇 研究内容22-43
• 第一章 BCG免疫小鼠、样本收集及血清特异性抗体测定22-27
• 1.1 材料和方法22-24
• 1.2 结果与分析24-25
• 1.3 讨论25-27
• 第二章 小鼠脾脏中部分免疫相关细胞因子表达水平的检测27-34
• 2.1 材料和方法27-30
• 2.1.1 材料27
• 2.1.2 试验方法27-30
• 2.2 结果与分析30-33
• 2.2.1 小鼠脾脏总RNA琼脂糖凝胶电泳检测结果30
• 2.2.2 目的基因的荧光定量结果30-31
• 2.2.3 数据分析结果31-33
• 2.3 讨论33-34
• 第三章 小鼠脾脏中免疫相关受体表达分布情况的检测34-43
• 3.1 材料和方法34-36
• 3.1.1 材料34-35
• 3.1.2 实验方法35-36
• 3.1.3 图像分析及统计学处理36
• 3.2 结果与分析36-41
• 3.2.1 小鼠脾脏TLR2受体的免疫荧光染色结果36-38
• 3.2.2 小鼠脾脏TLR9受体的免疫荧光染色结果38-40
• 3.2.3 阴性对照组免疫荧光染色结果40
• 3.2.4 小鼠脾脏的HE染色结果40-41
• 3.3 讨论41-43
• 结论43-44
• 参考文献44-54
• 作者简介54-55
• 致谢55

【共引文献】

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1 汤建中;张爱君;刘宏鹏;丁淑琴;徐广贤;;结核分枝杆菌溶血磷脂酶对RAW264.7细胞因子及细胞凋亡的影响[J];黑龙江畜牧兽医;2014年24期

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本文编号：333460