慢病毒介导TFAM/POLG基因knock-down小鼠的建立

发布时间：2021-08-11 04:10

　　目的本课题以为研究表皮干细胞线粒体为新的切入点,通过体外构建miRNA分子表达载体,体外筛选干扰效率最高的重组慢病毒,通过卵周隙显微注射这一病毒建立基因沉默小鼠,并对小鼠进行检测,得到目标基因沉默小鼠模型,研究TFAM/POLG基因沉默下,表皮干细胞生物行为行为变化情况,为深入探讨ESC的增殖分化机制,提供新的理论依据。方法1、第一部分通过网站在线设计软件（ http://katahdin.cshl.org:9331/ homepage/portal/Scripts/main2.pl）,针对小鼠目标基因TFAM和POLG分别设计了三个条miR-shRNA分子序列;并通过DNA重组技术,以慢病毒载体FUGW为骨架,构建出miR30-based shRNA的重组慢病毒表达载体,并通过酶切鉴定与测序检测验证重组序列的准确性。通过“三质粒包装系统”,利用293FT细胞分别对上述重组慢病毒载体进行病毒包装,浓缩病毒悬液,制备出大于109的高滴度的重组慢病毒液;利用小鼠成纤维细胞进行病毒干扰效率的检测。2、第二部分使用上述筛选出来的慢病毒载体并结合显微注射技术,完成了对卵周隙的病毒载体显微注射,培... 

【文章来源】：锦州医科大学辽宁省

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

AFUGW质粒

包装质粒psPAX2

包膜质粒PMD2.G


本文编号：3335421