人源诺如病毒细胞表面展示体系的构建与应用

发布时间：2021-08-13 15:59

　　人源诺如病毒（human noroviruses,HuNoVs）是引发人类急性胃肠炎的重要病原体之一;主要流行株为GII.4基因型。生菜、牡蛎等为其主要传播载体。由于缺乏成熟的体外培养模式和动物模型,阻碍了HuNoVs的研究进展。因此,发掘HuNoVs的受/配体成为破解该瓶颈的重要途径。在前期研究基础上,本研究在锚定蛋白编码基因（inaQn）和HuNoV（GII.4）主要衣壳蛋白P结构域编码基因之间插入一段编码凝血酶识别位点的核酸片段,构建升级版“假HuNoV”。经凝血酶处理后,大肠杆菌表面展示的P蛋白可与菌体分离,且解离的P蛋白可自动折叠成P颗粒。ELISA结果表明:所解离的P蛋白具备识别并结合HuNoVs特异性受体——组织血型抗原（Histo-blood group antigens,HBGAs）的能力。“假HuNoV”与HBGAs孵育,处理后可获得P蛋白-HBGAs复合物。ELISA结果表明:该体系可特异性捕获A型HBGA。将升级版“假HuNoV”与生菜提取物孵育,处理后可获得P蛋白-病毒配体的复合物。ELISA结果显示:生菜中含有可被A、H1和Lewis a型HBGA单克隆抗体... 

【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

各型HBGAs的生物合成的流程图

25图 2-1 重组表达载体的酶切验证 of recombinant expression vectors digested bM：1 kb DNA Ladder (M1181) pET28a-inaQn-20T-P (GII.4) (Nco I & EcoR 2: pET28a-inaQn-20T-P (GII.4) (Bgl II)对重组菌进行鉴定，验证体系的构建测序验证。用 BLAST 对测序结果进的 GII.4 ORF2 3’端基因与 No. K测序验证后，我们用 ExPASy 软件进氨基酸序列中间没有表现出终止突变-inaQn-TB-P(GII.4)构建成功。

可知，诱导后的重组菌3一P(GIL4阳L21表达出明显的目的条带的(约70kDa)

【参考文献】：
博士论文
[1]利用冰晶核蛋白构建细菌细胞表面展示体系及其应用研究[D]. 李茜茜.华中农业大学 2009



本文编号：3340722