蝙蝠来源的重症急性呼吸综合征样冠状病毒WIV1刺突蛋白利用浣熊狗血管紧张素转换酶Ⅱ受体侵入细胞能力的研究

发布时间：2021-08-17 22:56

　　目的研究蝙蝠来源的重症急性呼吸综合征（SARS）样冠状病毒WIV1刺突蛋白利用浣熊狗血管紧张素转换酶Ⅱ（ACE2）受体侵入细胞的能力,并探究SARS样冠状病毒WIV1潜在的跨宿主传播风险。方法构建来自浣熊狗、果子狸、中华菊头蝠和人等不同动物来源的ACE2表达质粒,转染至293T细胞并利用免疫印迹方法检测其在293T细胞中的表达水平;建立SARS冠状病毒（Tor2株系）及蝙蝠SARS样冠状病毒（WIV1株系）假病毒感染系统,并进行假病毒感染实验;利用假病毒感染系统及荧光素酶报告基因检测WIV1刺突蛋白对浣熊狗等不同动物来源ACE2受体利用能力;构建跨膜丝氨酸蛋白酶2（TMPRSS2）质粒,并转染至T Rex 293细胞,借助假病毒感染系统检测TMPRSS2对WIV1侵入能力的影响。结果本研究所获赠及构建的不同动物来源的ACE2质粒可经瞬时转染至细胞进行表达;与pc DNA3.1载体相比,浣熊狗、中华菊头蝠、果子狸和人的ACE2均可使蝙蝠SARS样冠状病毒WIV1侵入细胞的能力增加上万倍,上述ACE2组与载体组的荧光素酶活性差异均具有统计学意义（t=27.744、P <0.001,t... 

【文章来源】：中华实验和临床感染病杂志(电子版). 2019,13(05)

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

TMPRSS2对SARS-Co V(Tor2株系）假病毒及蝙蝠SARS样冠状病毒WIV1假病毒感染能力的影响

SARS-Co V(Tor2株系）假病毒和SARS样冠状病毒WIV1假病毒利用不同动物来源ACE2受体侵入细胞的能力

为进一步探究蝙蝠SARS样冠状病毒WIV1是否可利用来自浣熊狗的ACE2受体，本研究制备了蝙蝠SARS样冠状病毒WIV1假病毒及SARS-C o V(To r 2株系）假病毒（对照），并利用上述假病毒感染实验检测其对转染了不同动物来源ACE2质粒的T Rex293细胞的侵染能力。结果显示，SARS-Co V(Tor2株系）假病毒利用人、果子狸和浣熊狗ACE2侵入细胞的能力显著高于pc DNA3.1载体，上述ACE2组与载体组间荧光素酶活性差异均具有统计学意义（t=20.871、P<0.001,t=14.911、P<0.001,t=12.511、P<0.0 0 1）；而仅能以极弱的能力利用中华菊头蝠ACE2受体侵入细胞，且与载体组间的荧光素酶活性差异有统计学意义（t=7.619、P<0.001）（图2A）。本实验与既往研究一致[5-6]，再次证明本实验室的ACE2质粒可正常发挥受体功能。此外，与pc DNA3.1载体组相比，浣熊狗、中华菊头蝠、果子狸和人的ACE2可使蝙蝠SARS样冠状病毒WIV1侵入细胞的能力增加上万倍，上述ACE2组与载体组间荧光素酶活性差异均具有统计学意义（t=27.744、P<0.001,t=18.740、P<0.001,t=32.297、P<0.001,t=15.902、P<0.001）（图2B）。图2 SARS-Co V(Tor2株系）假病毒和SARS样冠状病毒WIV1假病毒利用不同动物来源ACE2受体侵入细胞的能力


本文编号：3348668