HNF4α抑制YAP-TEAD在大小鼠肝细胞癌模型中的作用研究

发布时间：2021-08-20 12:54

　　HNF4α,肝细胞核因子α,是肝脏发育和维持稳态过程中的关键转录因子。在已有的研究中已经有很多报道称HNF4α在肝细胞癌样品中的表达量下降,更有报道详细说明了 HNF4α抑制肝细胞癌发生发展的能力和具体分子机理。Hippo信号通路作为调控细胞增殖与分化的重要信号通路,其调控转录的核心转录因子蛋白YAP是典型的原癌基因。YAP在多种癌症中均有不同程度的上调,尤其在肝细胞癌中幅度大,范围广,表明其与肝癌的发生发展有重要关系。本课题组在此前已经对HNF4α和YAP1-TEAD转录因子集团之间的关系进行了深入细致的研究,并发现了 HNF4α可以通过与YAP1竞争性结合TEAD的方式抑制YAP1-TEAD下游靶基因的活性。在本文中,我们利用了细胞,大鼠,小鼠模型,通过western blot,实时荧光定量PCR,Luciferase,免疫组化等实验,从不同角度阐述了内源情况下HNF4α对YAP1-TEAD转录因子集团的抑制作用。由于YAP在肝细胞癌中作用的广谱性,我们的研究为未来的肝细胞癌治疗方法提供了新的思路,通过HNF4α蛋白来抑制Hippo信号通路下游靶基因的活性,并进一步抑制肝细胞癌的发... 

【文章来源】：厦门大学福建省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１．２?Ｈｉｐｐ？信号通路结构??Ｆｉｇｕｒｅｌ．２?Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?Ｈｉｐｐｏ?ｓｉｇｎａｌｉｎｇ?ｐａｔｈｗａｙ??

Ｆｉｇｕｒｅ３．１?Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＹＡＰ?ａｎｄ?ＨＮＦ４ａ?ｉｎ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｈｅｐａｔｏｍａ?ｃｅｌｌ?ｌｉｎｅｓ??３．２?ＨＮＦ４ａ与ＹＡＰｌ竞争性结合ＴＥＡＤ从而抑制ＹＡＰ１－ＴＥＡＤ的下游靶??基因表达水平??３．２．１?ＴＥＡＤ１和ＴＥＡＤ４在肝细胞癌中起主要作用??为保证实验的准确性，我们首先在多种肝癌细胞系中检测了?ＴＥＡＤ转录子家族四个主要成员蛋白的相对ｍＲＮＡ表达量。由图３．２司见，在六种４、同的??肝癌细胞系中，ＴＥＡＤ４均表现出了较高的表达量，ＴＥＡＤ１在除ＨｅｐＧ２之外的??其他细胞系中也均有较高表达，而ＴＥＡＤ２和ＴＥＡＤ３则在大多数肝癌细胞系中??都呈现低表达状况（图３．２）。因此我们认为，ＴＥＡＤ１和ＴＥＡＤ４在肝癌中起到主??

下游靶基因的检测中，我们选取了?ＣＴＧＦ，ＣＣＮＤ１，ＣＹＲ６１和ＥＤＮ１作为检测??目标。可以看到，在阳性对照组中，四个靶基因均发生了明显的上调，而过表达??了?ＨＮＦ４ａ的实验组则有效的回调了四个靶基因（图３．１０）。??ｗ?３〇，?—?■?ＷＴ＋ａｄ－ＧＦＰ??ＷＴ?ＤＫＯ?ＤＫＯ?｜?Ｔ＊?■?ＤＫＯ＋ａｄ－ＧＦＰ??ａｄ－ＧＦＰ?ａｄ－ＧＦＰ?ａｄ－ＨＮＦ４ｃ?＾?＾?ｇ?■?ＤＫＯ＋ａｄ－ＨＮＦ４ａ??ＹＡＰ１?一一—■上?？广??ｐＹＡＰ１?＊—?Ｉ?ｉ〇－?ｌ｜?＾??ＨＮＦ４ａ??????｜?５－?■■矗．．??ｐ－ａｃｔｉｎ?｜＿■＂丨－ｍ—ｐ—＞一?■，一?ａ?ｏ??ＣＴＧＦ?ＣＣＮＤ１?ＣＹＲ６１?ＥＤＮ１??图３．?１０?ＨＮＦ４ａ回调ＹＡＰｌ－ＴＥＡＤ下游勒基因的表达??Ｆｉｇｕｒｅ３．１０?ＨＮＦ４ａ?ｒｅｐｒｅｓｓｅｄ?ＹＡＰ１－ＴＥＡＤ?ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ?ｇｅｎｅ?ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，??ｄｅｔｅｃｔｅｄ?ｂｙ?ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ?ａｎｄ?Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ?ＰＣＲ??接着我们对部分肝组织进行了石蜡包埋和切片，然后对切片进行了免疫组化??实验，所得结果基本和蛋白及ＲＮＡ的检测实验一致。对比阴性对照组，阳性对照??组和实验组的ＹＡＰ１表达有明显上调，并伴有增强的核定位，而ｐＹＡＰｌ则有明??显下调。ＨＮＦ４ａ在注射了过表达腺病毒的实验组上调明显，并且基本都定位在??核内


本文编号：3353535