重组人源化抗CD52单克隆抗体生物学活性检测方法的优化及验证

发布时间：2021-08-27 16:02

　　药物的生物学活性评价,是药物研究开发过程中的重要环节,是判定药物是否具有研究价值及确定研究方向的关键评价点。对重组抗体进行体外生物学活性评价,可为产品的工艺研究优化提供方向,保证生产过程中的质量把控。本论文以重组人源化抗CD52单克隆抗体为目标药物,建立和优化ATP法测定药物补体依赖细胞毒性（CDC）的检测方法。重组人源化抗CD52单克隆抗体是仿制国外已上市药物Campath研究开发,测定抗体CDC活性时,以Campath作为参考对照品,以两者的相对CDC活性来评价本抗体的生物学活性。ATP法测定抗体CDC活性基于使用荧光素酶系统对三磷酸腺苷（ATP）浓度的测定,由于ATP在细胞死亡后迅速降解,其浓度与细胞数量有关,同时荧光素光的强度又与ATP浓度呈线性关系。生物测定中由于各个水平的偏差趋势可对测定结果产生巨大影响,因此对各因素偏差趋势的限制有助于提高方法的准确性,通过对靶细胞的研究筛选,选取最适合该检测的目标细胞,对反应体系,标准曲线、补体等关键因素进行优化,得到稳定精确的检测方法并进行验证。结果将单克隆抗体酶解后,利用液相色谱仪分离检测各肽段,两种抗体液相图谱表现一致,CDR区的保... 

【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：硕士

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三批重组人源化抗CD52单克隆抗体与Campath糖型叠加图谱

图 2-1 三批重组人源化抗 CD52 单克隆抗体与 Campath 糖型叠加图谱Fig.2-1 Three batches of recombinant humanized anti-CD52 monoclonal antibody andCampath glycoform overlay单克隆抗体的糖基是生物学活性的关键因素，有介导受体识别的作用，且关系到药物的安全有效性，因此分析糖基结构是质量研究和控制的重要部分。重组人源化抗 CD52 单克隆抗体与 Campath 糖基的图谱见图 2-1，从色谱图中可以看出三批重组人源化抗 CD52 单克隆抗体与 Campath 的峰形一致。2.3.2. HPLC 法测定肽图谱

20c)Ramos 细胞生长曲线c) Ramos growth curve图 3-1 靶细胞系生长曲线Fig.3-1 Growth curve of target cell line生物学活性实验要求细胞状态处于对数生长期。HUT78、MC/CAR、Ram胞均为悬浮生长型细胞系，因此以摇瓶生长状态测定细胞生长曲线。取种子胞解冻复苏后，至细胞培养瓶中，在 37 度 5%CO2中静置培养，确定细胞好后，转移至摇瓶培养，每 24 小时计数一次，连续计数 7 天后，可得到细胞曲线如图 3-1 所示。根据三种细胞系的生长曲线可发现，HUT78 细胞生长速显快于 MC/CAR 及 Ramos 细胞，并且最高细胞密度也高于另两种细胞，最高


本文编号：3366658