人Fcα/μR配体结合位点研究

发布时间：2021-08-27 23:04

　　免疫球蛋白Fc受体（FcR）能与抗体的Fc段结合并介导一系列的细胞反应,在机体的免疫防御中发挥重要作用。人Fcα/μR （CD351）是一种能特异性结合IgA和IgM两种配体的Fc受体,属Ⅰ型跨膜糖蛋白,其膜外区含三个结构域,即EC1,EC2和EC3。其中EC2为免疫球蛋白可变区样结构,与同为IgA和IgM受体的多聚免疫球蛋白受体（pIgR）的D1结构域在氨基酸序列上有43%的同源性,是预测的配体结合功能域。本研究的目的是探讨人Fcα/μR-EC2结构域中参与结合IgA和IgM的氨基酸位点,以便了解该受体的结构和功能的关系。为了能够了解Fcα/μR-EC2结构域中功能氨基酸的位点,我们首先用序列比对和同源建模的方法借用pIgR-D1的晶体结构模拟出Fcα/μR-EC2结构域的空间结构,推测出APSSVNRHQ, STNQY, SENNM为相应的三个CDR样环,其位置显示它们均可能参与受体与配体的结合。为了实际观察Fcα/μR-EC2与配体的结合情况,我们首先对所预测的三个CDR样环分别用无配体结合功能的pIgR-D2结构域中的相应CDR样环取代。利用拼接聚合酶链式反应（SOE-PCR）... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：113 页

【学位级别】：博士

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目录
中文摘要
ABSTRACT
缩略词英汉对照表
前言
实验材料
    一、主要化学试剂
    二、抗体
    三、细胞系
    四、工具酶、分子量标准及试剂盒
    五、质粒载体
    六、菌株
    七、仪器设备
    八、软件
实验方法
    [分子生物学相关实验]
        一、常规表达质粒构建
        二、哺乳动物细胞的冻存、复苏、转染
        三、建立稳定细胞株
    [免疫学相关实验]
        一、荧光流式细胞分析技术
        二、激光扫描共聚焦显微镜
        三、蛋白质的SDS-PAGE梯度凝胶电泳
        四、湿转法Western Blot
实验结果
    1. 人Fcα/μR-EC2结构域的同源建模
    2. 野生型人Fcα/μR在真核细胞上的表达及配体结合鉴定
    3. 人Fcα/μR-EC2结构域中三个CDR样环对人Fcα/μR配体结合能力的影响
        3.1. 人Fcα/μR-EC2结构域CDR样环置换突变体的构建
        3.2. 人Fcα/μR-EC2结构域CDR样环置换突变体的表达
        3.3. 人Fcα/μR-EC2结构域三个CDR样环对结合IgA的影响
        3.4. 人Fcα/μR-EC2结构域三个CDR样环对结合IgM的影响
    4. 人Fcα/μR-EC2结构域CDR样环内氨基酸对人Fcα/μR配体结合能力的影响
        4.1. 人Fcα/μR-EC2结构域CDR样环内点突变受体的构建
        4.2. CDR1、CDR2样环状结构内氨基酸对人Fcα/μR结合IgA的影响
        4.3. CDR1、CDR2样环状结构内氨基酸对人Fcα/μR结合IgM的影响
        4.4. CDR3样环状结构内氨基酸对人Fcα/μR结合IgA的影响
        4.5. CDR3样环状结构内氨基酸对人Fcα/μR结合IgM的影响
结论
讨论
    1. 人Fcα/μR-EC2结构域CDR样环对配体结合的影响
    2. 人Fcα/μR在IgM上结合位点的推测
    3. 对实验研究方法的考虑
        3.1. 同源建模辅助蛋白质结构与功能的研究
        3.2. 人Fcα/μR突变体构建方法的选择
        3.3. 人Fcα/μR表达细胞系的选择
参考文献
综述
    参考文献
附录
    附录Ⅰ 质粒载体图谱和多克隆位点
    附录Ⅱ 人fcamr突变实验引物序列表
    附录Ⅲ 氨基酸缩写对照表
    附录Ⅳ 人fcamr核苷酸序列
    附录Ⅴ 人Fcα/μR氨基酸序列
    附录Ⅵ 人pigr核苷酸序列
    附录Ⅶ 人pIgR氨基酸序列
    附录Ⅷ 攻读博士学位期间发表文章情况
致谢
个人简历



本文编号：3367274