细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白2A(CDKN2A/p16 INK4a )在MCF7细胞中的可诱导表达并引起F-actin

发布时间：2021-08-28 11:28

　　目的使用四环素操纵子（Tet-on）可控表达系统研究细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白2A(CDKN2A/p16^INK4a)对MCF7乳腺癌细胞形态及细胞骨架的影响。方法以p16^INK4a表达缺失的MCF7乳腺癌细胞为宿主细胞,用慢病毒通过"两步感染法"建立MCF7-p Tet-on-p16^INK4a可诱导表达细胞系,加入诱导剂强力霉素（Dox）诱导目的基因表达;细胞计数检测细胞生长变化;采用免疫细胞化学染色检测上皮钙黏素（E-cadherin）表达,采用鬼笔环肽（phalloidin）标记纤维型肌动蛋白（F-actin）,观察p16^INK4a对细胞间黏附连接、细胞骨架的影响;用显微镜对细胞拍照后,用Image J软件进行形态分析。结果成功建立了可诱导表达p16^INK4a的MCF7稳定细胞系,Dox可以有效诱导p16^INK4a的表达;诱导条件下稳定表达p16^INK4a的MCF7细胞增殖受抑制,细胞体积增大,轮廓线延长;而对照MCF7细胞F... 

【文章来源】：细胞与分子免疫学杂志. 2017,33(04)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 反应质粒p LVX-Tight-puro-p16INK4a的构建
        1.2.2 慢病毒包装、感染
        1.2.3 MCF7-p Tet-on的单克隆细胞株筛选
        1.2.4 Western blot法检测MCF7细胞中Tet R、p16INK4a、tubulin、E-cadherin蛋白表达水平
        1.2.5 免疫荧光细胞化学染色检测MCF7细胞p16INK4a、F-actin及E-cadherin的表达分布
2 结果
    2.1 反应质粒p LVX-Tight-puro-p16INK4a的构建
    2.2 MCF7-p Tet-on-p16INK4a可诱导表达系统的建立
    2.3 MCF7-p Tet-on-p16INK4a可诱导表达系统的检测
    2.4 乳腺癌MCF7细胞过表达p16INK4a影响细胞骨架的重新分布
3 讨论



本文编号：3368428