小鼠来源调节性T细胞的体外扩增培养及鉴定
发布时间：2021-08-31 21:35
目的建立小鼠来源调节性T细胞（Tregs）体外扩增培养方法,并检测扩增细胞的表型及体外免疫抑制功能,为Tregs应用于临床免疫治疗提供实验基础。方法利用免疫磁珠分离（MACS）方法从BALB/c小鼠脾脏中分选出CD4+T细胞,加入anti-CD3/CD28抗体、100 U/ml白细胞介素-2（IL-2）和5 ng/ml重组人转化生长因子β（rhTGF-β）体外扩增5 d。流式细胞术检测扩增后Tregs纯度及免疫抑制功能,台盼蓝染色法测定扩增后Tregs的数量和活性。结果扩增5 d后Tregs数目约为新鲜分选CD4+T细胞的20倍,细胞活性为（93±4）%。扩增得到的Tregs纯度为（79. 1±1. 5）%且具有免疫抑制功能。结论本实验方法可以大量扩增出高纯度且具有免疫抑制功能的Tregs,解决了Tregs数目少的问题,有利于进一步的免疫研究和治疗。
【文章来源】：中国医师杂志. 2019,21(10)
【文章页数】：4 页
【部分图文】：
流式细胞术检测细胞纯度A:新鲜分选的CD4+T细胞;B:扩增后的CD4+Foxp3+Tregs;Tregs:调节性T细胞
图2扩增后调节性T细胞(Tregs)免疫抑制功能检测m为Teff增值比例;A为Teff+anti-CD3/CD28;B为Teff∶Tregs=1∶1+anti-CD3/CD28;C为Teff∶Tregs=1∶2+anti-CD3/CD28增5d，能得到数目约为新鲜分选CD4+T细胞20倍的Tregs［新鲜分选的CD4+T细胞数量为(5.3±0.6)×106;扩增后Tregs数量为(102±4)×106］，台盼蓝染色显示活细胞率为(93±4)%，见图3。图3扩增后调节性T细胞(Tregs)数量及活力A:Tregs数量;B:Tregs活力3讨论Tregs是Sakaguchi等在1995年首次报道的一种具有免疫调节功能的T细胞亚群［5］，根据来源和效应机制分为两大类:一类是胸腺来源的天然调节性T细胞(naturalregulatoryTcells，nTregs)，其特征标志为高表达转录因子Foxp3，构成性表达IL-2受体的α链(CD25)，分泌TGF-β和IL-10［6］。另一类是外周诱导得到的诱导性调节性T细胞(inducedregulatoryTcells，iTregs)，是在小剂量抗原或免疫抑制性细胞因子诱导下由外周幼稚T淋巴细胞发育而成，包括高分泌IL-10的Tr1和高分泌TGF-β的Th3两个亚群，这两个亚群表达或不表达Foxp3［7］。目前研究表明，Tregs通过分泌抗炎症细胞因子(如TGF-β、IL-10)或通过细胞之间接触［如Tregs表面细胞毒性T淋巴细胞抗原(CytotoxicT-LymphocyteAntigen4，4CTLA-4)与抗原提呈细胞(AntigenPres-entingCells，APCs)表面CD80/CD86］，负向调节免疫反应［8］。因此，Tregs在维持自身免疫耐受中起着重要作用?
图2扩增后调节性T细胞(Tregs)免疫抑制功能检测m为Teff增值比例;A为Teff+anti-CD3/CD28;B为Teff∶Tregs=1∶1+anti-CD3/CD28;C为Teff∶Tregs=1∶2+anti-CD3/CD28增5d，能得到数目约为新鲜分选CD4+T细胞20倍的Tregs［新鲜分选的CD4+T细胞数量为(5.3±0.6)×106;扩增后Tregs数量为(102±4)×106］，台盼蓝染色显示活细胞率为(93±4)%，见图3。图3扩增后调节性T细胞(Tregs)数量及活力A:Tregs数量;B:Tregs活力3讨论Tregs是Sakaguchi等在1995年首次报道的一种具有免疫调节功能的T细胞亚群［5］，根据来源和效应机制分为两大类:一类是胸腺来源的天然调节性T细胞(naturalregulatoryTcells，nTregs)，其特征标志为高表达转录因子Foxp3，构成性表达IL-2受体的α链(CD25)，分泌TGF-β和IL-10［6］。另一类是外周诱导得到的诱导性调节性T细胞(inducedregulatoryTcells，iTregs)，是在小剂量抗原或免疫抑制性细胞因子诱导下由外周幼稚T淋巴细胞发育而成，包括高分泌IL-10的Tr1和高分泌TGF-β的Th3两个亚群，这两个亚群表达或不表达Foxp3［7］。目前研究表明，Tregs通过分泌抗炎症细胞因子(如TGF-β、IL-10)或通过细胞之间接触［如Tregs表面细胞毒性T淋巴细胞抗原(CytotoxicT-LymphocyteAntigen4，4CTLA-4)与抗原提呈细胞(AntigenPres-entingCells，APCs)表面CD80/CD86］，负向调节免疫反应［8］。因此，Tregs在维持自身免疫耐受中起着重要作用?
【参考文献】：
期刊论文
[1]抗原特异性调节性T细胞的研究进展及其在临床中的应用前景[J]. 金熙,李虹. 华西医学. 2018(05)
[2]原发性高血压中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的作用机制[J]. 陶然,黄红光. 中国医师杂志. 2018 (01)
[3]人外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞分选及扩增方法的建立[J]. 祝丽琼,陈慧,袁昱,刘梅兰,魏菁,苏芳,张建平. 热带医学杂志. 2017(08)
[4]CD4+C25+Foxp3+调节性T细胞在自身免疫性疾病中的研究进展[J]. 史国星,曾强,窦剑,李伟. 免疫学杂志. 2016(12)
[5]Treg细胞与肿瘤免疫的关系[J]. 李晓英,罗福康,谢启超. 重庆医学. 2016(25)
本文编号：3375654
【文章来源】：中国医师杂志. 2019,21(10)
【文章页数】：4 页
【部分图文】：
流式细胞术检测细胞纯度A:新鲜分选的CD4+T细胞;B:扩增后的CD4+Foxp3+Tregs;Tregs:调节性T细胞
图2扩增后调节性T细胞(Tregs)免疫抑制功能检测m为Teff增值比例;A为Teff+anti-CD3/CD28;B为Teff∶Tregs=1∶1+anti-CD3/CD28;C为Teff∶Tregs=1∶2+anti-CD3/CD28增5d，能得到数目约为新鲜分选CD4+T细胞20倍的Tregs［新鲜分选的CD4+T细胞数量为(5.3±0.6)×106;扩增后Tregs数量为(102±4)×106］，台盼蓝染色显示活细胞率为(93±4)%，见图3。图3扩增后调节性T细胞(Tregs)数量及活力A:Tregs数量;B:Tregs活力3讨论Tregs是Sakaguchi等在1995年首次报道的一种具有免疫调节功能的T细胞亚群［5］，根据来源和效应机制分为两大类:一类是胸腺来源的天然调节性T细胞(naturalregulatoryTcells，nTregs)，其特征标志为高表达转录因子Foxp3，构成性表达IL-2受体的α链(CD25)，分泌TGF-β和IL-10［6］。另一类是外周诱导得到的诱导性调节性T细胞(inducedregulatoryTcells，iTregs)，是在小剂量抗原或免疫抑制性细胞因子诱导下由外周幼稚T淋巴细胞发育而成，包括高分泌IL-10的Tr1和高分泌TGF-β的Th3两个亚群，这两个亚群表达或不表达Foxp3［7］。目前研究表明，Tregs通过分泌抗炎症细胞因子(如TGF-β、IL-10)或通过细胞之间接触［如Tregs表面细胞毒性T淋巴细胞抗原(CytotoxicT-LymphocyteAntigen4，4CTLA-4)与抗原提呈细胞(AntigenPres-entingCells，APCs)表面CD80/CD86］，负向调节免疫反应［8］。因此，Tregs在维持自身免疫耐受中起着重要作用?
图2扩增后调节性T细胞(Tregs)免疫抑制功能检测m为Teff增值比例;A为Teff+anti-CD3/CD28;B为Teff∶Tregs=1∶1+anti-CD3/CD28;C为Teff∶Tregs=1∶2+anti-CD3/CD28增5d，能得到数目约为新鲜分选CD4+T细胞20倍的Tregs［新鲜分选的CD4+T细胞数量为(5.3±0.6)×106;扩增后Tregs数量为(102±4)×106］，台盼蓝染色显示活细胞率为(93±4)%，见图3。图3扩增后调节性T细胞(Tregs)数量及活力A:Tregs数量;B:Tregs活力3讨论Tregs是Sakaguchi等在1995年首次报道的一种具有免疫调节功能的T细胞亚群［5］，根据来源和效应机制分为两大类:一类是胸腺来源的天然调节性T细胞(naturalregulatoryTcells，nTregs)，其特征标志为高表达转录因子Foxp3，构成性表达IL-2受体的α链(CD25)，分泌TGF-β和IL-10［6］。另一类是外周诱导得到的诱导性调节性T细胞(inducedregulatoryTcells，iTregs)，是在小剂量抗原或免疫抑制性细胞因子诱导下由外周幼稚T淋巴细胞发育而成，包括高分泌IL-10的Tr1和高分泌TGF-β的Th3两个亚群，这两个亚群表达或不表达Foxp3［7］。目前研究表明，Tregs通过分泌抗炎症细胞因子(如TGF-β、IL-10)或通过细胞之间接触［如Tregs表面细胞毒性T淋巴细胞抗原(CytotoxicT-LymphocyteAntigen4，4CTLA-4)与抗原提呈细胞(AntigenPres-entingCells，APCs)表面CD80/CD86］，负向调节免疫反应［8］。因此，Tregs在维持自身免疫耐受中起着重要作用?
【参考文献】：
期刊论文
[1]抗原特异性调节性T细胞的研究进展及其在临床中的应用前景[J]. 金熙,李虹. 华西医学. 2018(05)
[2]原发性高血压中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的作用机制[J]. 陶然,黄红光. 中国医师杂志. 2018 (01)
[3]人外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞分选及扩增方法的建立[J]. 祝丽琼,陈慧,袁昱,刘梅兰,魏菁,苏芳,张建平. 热带医学杂志. 2017(08)
[4]CD4+C25+Foxp3+调节性T细胞在自身免疫性疾病中的研究进展[J]. 史国星,曾强,窦剑,李伟. 免疫学杂志. 2016(12)
[5]Treg细胞与肿瘤免疫的关系[J]. 李晓英,罗福康,谢启超. 重庆医学. 2016(25)
本文编号：3375654
本文链接：https://www.wllwen.com/xiyixuelunwen/3375654.html
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