ATP酶染色法在骨骼肌培养细胞中的应用研究
发布时间：2021-09-12 18:11
目的:应用肌球蛋白ATP酶组织化学染色法分析并鉴定家兔骨骼肌及其培养细胞的肌细胞类型,并通过与相应的MHC同工型基因表达水平进行比较,探讨肌球蛋白ATP酶组织化学染色法在体外培养肌细胞中应用的可行性及其与肌纤维类型转换过程的关系。方法:1取家兔慢肌纤维（I型,固有半膜肌亚部）和快肌纤维（Ⅱ型,副半膜肌背侧亚部）通过ATP酶染色,鉴定肌纤维类型。2取家兔慢肌纤维和快肌纤维组织块进行细胞分离和原代培养并观察。3待两亚型肌细胞生长良好后分别制作细胞爬片,并对第3天和第7天细胞爬片的细胞破膜后进行ATP酶组织化学染色,观察并鉴定肌细胞类型,并与MHC同工型基因检测进行比较验证。运用RT-PCR检测两种肌细胞的MHC同工型基因的表达。结果:（1）家兔骨骼肌组织染色结果显示,经pH4.3的酸预孵流程后,I型肌纤维（即慢肌纤维）深染,II型肌纤维（即快肌纤维）浅染;反之,经pH10.4的碱预孵流程后,II型肌纤维染色较深,而I型肌纤维则为浅染色。（2）分离并培养原代细胞,形成密度控制在1×105/ml的成肌细胞体系留待后续实验使用。（3）第3天细胞爬片中,经pH4.3的酸孵育流...
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
固有半膜肌
棒搅拌均匀后分装于 2 个 500ml 输液瓶中标记备用。1.2.10 碱性洗液：取 1L 蓝口瓶，加入 517.5ml 0.35mol/L Tris 缓冲液，用 3mol/L溶液调节 pH 至 9.4，加入超纯水定容至 1L 后分装至 2 个 500ml 输液瓶中，标记备1.2.11 2%CoCl2溶液：用电子天平称量 3g 无水 CoCl2粉末，倒入 150ml 超纯水中拌均匀。该溶液制备 2 份。1.2.12 1%(NH4)2S 溶液：用一次性吸管吸取 1.5ml(NH4)2S 溶液，加入 150ml 超纯吹打混匀，由于该液体有刺激性气味，现用现配。该溶液制备 2 份。1.3 实验方法1.3.1 实验家兔组织取材1.3.1.1 解剖取材：经家兔耳缘静脉空气栓塞法处死实验家后固定于兔解剖台上大腿后侧局部兔毛剪除并喷洒酒精进行消毒，铺好无菌洞单，通过相对无菌手术取实验兔双侧大腿部位固有半膜肌（即 I 型慢肌纤维，呈红色，见图 1 示）和副肌的背侧亚部（即 II 型快肌纤维，呈白色，见图 2 示）组织。
遵义医学院硕士学位论文 杨 瑾2.1 家兔两型肌纤维组织化学染色结果冰冻切片镜下观察示肌纤维横切面呈多边形或不规则形，铺路石样分布，边界较清晰。经 pH4.3 的酸预孵流程后，Ⅰ型肌纤维（固有半膜肌，慢肌纤维）染色较深（见图 3 所示），Ⅱ型肌纤维（副半膜肌背侧亚部，快肌纤维）染色相对较浅（见图 4所示）；经 pH10.4 的碱预孵流程后，Ⅱ型肌纤维染色较深（见图 6 所示），而Ⅰ型肌纤维较浅（见图 5 所示）。肌组织着色较为单一。2 结果
【参考文献】：
期刊论文
[1]不同强度运动对骨骼肌纤维MHC亚型转化及CaN/NFATc1信号通路的影响[J]. 尹丽琴,李范玲,汤长发,陶霞,刘文锋,黄洪波,邓勇,汤林. 中国应用生理学杂志. 2017(04)
[2]370例老年人4米直线步行速度调查分析[J]. 王芳,钱丹萍,黄峰. 福建医药杂志. 2017(03)
[3]MSTN基因对猪骨骼肌发育调控的作用及其研究进展[J]. 曹婷,周汉林,荀文娟,施力光,周雄,侯冠彧. 基因组学与应用生物学. 2017(04)
[4]骨骼肌纤维类型转化的分子调控机制研究进展[J]. 于亮,陈晓萍,王瑞元. 中国运动医学杂志. 2014(05)
[5]Myostatin基因及其与动物双肌性状间关系的研究进展[J]. 王建起,曹文广. 中国农业科学. 2014(08)
[6]组织化学染色法检测骨骼肌纤维类型[J]. 李江华,沙海燕,王智慧. 实验室研究与探索. 2010(10)
[7]调控骨骼肌纤维类型转化的信号通路[J]. 袁媛,刘月光,史新娥,杨公社. 中国生物化学与分子生物学报. 2010(09)
[8]低频复合生理频率电刺激对慢性低压缺氧兔颏舌肌肌球蛋白重链表达的影响[J]. 张妮,刘熙,刘刚. 第三军医大学学报. 2010(13)
[9]共轭亚油酸对体外培养的猪骨骼肌肌纤维类型组成的影响[J]. 黄金秀,杨飞云,刘作华,江山,肖融. 畜牧兽医学报. 2010(03)
[10]小鼠心肌组织3种总RNA提取方法比较[J]. 张宏山,许明,张阳,柳德斌,吴清玉,周玉祥. 临床心血管病杂志. 2010(02)
硕士论文
[1]两型骨骼肌纤维在体外培养过程中的相互转换[D]. 陈颖.遵义医学院 2016
[2]NR5A1/NR5A2在子痫前期患者蜕膜中的表达及功能研究[D]. 刘涛.山东师范大学 2015
[3]肌球蛋白Ⅱ单分子动力冲程的研究[D]. 邱伟.内蒙古大学 2011
[4]家兔半膜肌各亚部肌球蛋白重链表达差异的实验研究[D]. 陈渊.遵义医学院 2011
本文编号：3394699
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
固有半膜肌
棒搅拌均匀后分装于 2 个 500ml 输液瓶中标记备用。1.2.10 碱性洗液：取 1L 蓝口瓶，加入 517.5ml 0.35mol/L Tris 缓冲液，用 3mol/L溶液调节 pH 至 9.4，加入超纯水定容至 1L 后分装至 2 个 500ml 输液瓶中，标记备1.2.11 2%CoCl2溶液：用电子天平称量 3g 无水 CoCl2粉末，倒入 150ml 超纯水中拌均匀。该溶液制备 2 份。1.2.12 1%(NH4)2S 溶液：用一次性吸管吸取 1.5ml(NH4)2S 溶液，加入 150ml 超纯吹打混匀，由于该液体有刺激性气味，现用现配。该溶液制备 2 份。1.3 实验方法1.3.1 实验家兔组织取材1.3.1.1 解剖取材：经家兔耳缘静脉空气栓塞法处死实验家后固定于兔解剖台上大腿后侧局部兔毛剪除并喷洒酒精进行消毒，铺好无菌洞单，通过相对无菌手术取实验兔双侧大腿部位固有半膜肌（即 I 型慢肌纤维，呈红色，见图 1 示）和副肌的背侧亚部（即 II 型快肌纤维，呈白色，见图 2 示）组织。
遵义医学院硕士学位论文 杨 瑾2.1 家兔两型肌纤维组织化学染色结果冰冻切片镜下观察示肌纤维横切面呈多边形或不规则形，铺路石样分布，边界较清晰。经 pH4.3 的酸预孵流程后，Ⅰ型肌纤维（固有半膜肌，慢肌纤维）染色较深（见图 3 所示），Ⅱ型肌纤维（副半膜肌背侧亚部，快肌纤维）染色相对较浅（见图 4所示）；经 pH10.4 的碱预孵流程后，Ⅱ型肌纤维染色较深（见图 6 所示），而Ⅰ型肌纤维较浅（见图 5 所示）。肌组织着色较为单一。2 结果
【参考文献】：
期刊论文
[1]不同强度运动对骨骼肌纤维MHC亚型转化及CaN/NFATc1信号通路的影响[J]. 尹丽琴,李范玲,汤长发,陶霞,刘文锋,黄洪波,邓勇,汤林. 中国应用生理学杂志. 2017(04)
[2]370例老年人4米直线步行速度调查分析[J]. 王芳,钱丹萍,黄峰. 福建医药杂志. 2017(03)
[3]MSTN基因对猪骨骼肌发育调控的作用及其研究进展[J]. 曹婷,周汉林,荀文娟,施力光,周雄,侯冠彧. 基因组学与应用生物学. 2017(04)
[4]骨骼肌纤维类型转化的分子调控机制研究进展[J]. 于亮,陈晓萍,王瑞元. 中国运动医学杂志. 2014(05)
[5]Myostatin基因及其与动物双肌性状间关系的研究进展[J]. 王建起,曹文广. 中国农业科学. 2014(08)
[6]组织化学染色法检测骨骼肌纤维类型[J]. 李江华,沙海燕,王智慧. 实验室研究与探索. 2010(10)
[7]调控骨骼肌纤维类型转化的信号通路[J]. 袁媛,刘月光,史新娥,杨公社. 中国生物化学与分子生物学报. 2010(09)
[8]低频复合生理频率电刺激对慢性低压缺氧兔颏舌肌肌球蛋白重链表达的影响[J]. 张妮,刘熙,刘刚. 第三军医大学学报. 2010(13)
[9]共轭亚油酸对体外培养的猪骨骼肌肌纤维类型组成的影响[J]. 黄金秀,杨飞云,刘作华,江山,肖融. 畜牧兽医学报. 2010(03)
[10]小鼠心肌组织3种总RNA提取方法比较[J]. 张宏山,许明,张阳,柳德斌,吴清玉,周玉祥. 临床心血管病杂志. 2010(02)
硕士论文
[1]两型骨骼肌纤维在体外培养过程中的相互转换[D]. 陈颖.遵义医学院 2016
[2]NR5A1/NR5A2在子痫前期患者蜕膜中的表达及功能研究[D]. 刘涛.山东师范大学 2015
[3]肌球蛋白Ⅱ单分子动力冲程的研究[D]. 邱伟.内蒙古大学 2011
[4]家兔半膜肌各亚部肌球蛋白重链表达差异的实验研究[D]. 陈渊.遵义医学院 2011
本文编号：3394699
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