CaMKKβ通过激活AMPK/JAK2/STAT3信号促进小鼠单核巨噬细胞向M2表型转换

发布时间：2021-09-19 03:59

　　目的·探明钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶激酶β（CaMKKβ）在白介素4（IL-4）诱导的RAW264.7细胞极化过程中的作用和机制。方法·RT-PCR和ELISA检测IL-4诱导RAW264.7细胞极化水平,Western blotting测定极化过程中CaMKKβ、AMPK、JAK2、STAT3蛋白表达及磷酸化水平。慢病毒为载体的shRNA稳定干扰RAW264.7细胞CaMKKβ表达,RT-PCR和ELISA检测IL-4诱导下细胞极化水平的改变,Western blotting检测AMPK、JAK2、STAT3蛋白及磷酸化蛋白的表达。分别特异性阻断AMPK、JAK2和STAT3蛋白活性,经RT-PCR检测IL-4诱导下RAW264.7细胞极化水平的改变。结果·IL-4主要诱导RAW264.7细胞向M2型巨噬细胞极化（P<0.05）,且CaMKKβ、AMPK、JAK2、STAT3的磷酸化水平明显升高（均P<0.05）。shRNA稳定干扰RAW264.7细胞CaMKKβ表达后,IL-4促进巨噬细胞向M2型极化作用降低（P<0.05）,且AMPK、JAK2和STAT3的... 

【文章来源】：上海交通大学学报(医学版). 2017,37(07)北大核心CSCD

【文章页数】：10 页

【文章目录】：
1材料和方法
    1.1 主要材料
    1.2 方法
        1.2.1 细胞培养
        1.2.2 稳转细胞株的建立
        1.2.3 Western blotting检测目的蛋白表达量
        1.2.4 酶联免疫吸附试验测定细胞培养上清中目的蛋白分泌水平
        1.2.5 实时定量PCR检测目的基因m RNA水平
    1.3统计学处理
2结果
    2.1 IL-4诱导巨噬细胞向M2型转化, Ca MKKβ及下游的AMPK、JAK2、STAT3的磷酸化水平升高
    2.2 慢病毒介导sh RNA稳定干扰RAW264.7细胞Ca MKKβ表达后, IL-4诱导巨噬细胞向M2型极化的作用降低, AMPK、JAK2及STAT3的磷酸化水平下降
    2.3 抑制Raw 264.7细胞AMPK活性后, IL-4诱导下M2表型减少, JAK2及STAT3磷酸化水平降低
    2.4 分别特异性阻断JAK2和STAT3活性, 再经IL-4诱导, 巨噬细胞向M2型极化减少
3讨论



本文编号：3400968