NOC2L基因重组慢病毒表达载体的构建及其在293T细胞中的表达

发布时间：2021-10-02 00:52

　　目的构建NOC2L基因重组慢病毒并使其在293T细胞中表达。方法通过设计引物及PCR扩增获得NOC2L全基因片段,将pCDH-GFP载体分别用XbaⅠ和BamHⅠ双酶切制备线性化载体;NOC2L全基因片段和线性化载体经切胶回收后,通过同源重组反应将NOC2L全基因片段连接到线性化的pCDH-GFP载体上,构建pCDH-NOC2L-GFP慢病毒表达载体;通过菌落PCR、质粒双酶切、测序等方法对构建的NOC2L基因重组慢病毒表达载体进行鉴定,利用构建的pCDH-NOC2L-GFP包装NOC2L慢病毒并使用该慢病毒感染293T细胞。结果菌落PCR、质粒双酶切和测序结果显示成功将NOC2L基因连接到pCDH-GFP载体上,使用构建成功的pCDH-NOC2L-GFP转染293T细胞,能够成功转染及包装NOC2L基因重组慢病毒,同时包装好的NOC2L基因重组慢病毒能够成功感染293T细胞并过表达293T细胞中的NOC2L基因。结论采用本研究方法能成功构建NOC2L基因重组慢病毒表达载体。 

【文章来源】：右江医学. 2019,47(12)

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

NOC2L全基因组片段扩增产物1%琼脂糖凝胶电泳

对pCDH-GFP质粒进行双酶切后,进行1%琼脂糖凝胶电泳,在约7500 bp处出现条带,电泳结果见图2。双酶切产物经切胶回收后,获得30 μL浓度为24.20 ng/μL的线性化载体。2.3 同源重组

将NOC2L基因片段及线性化载体进行同源重组后,转化DH5α感受态细胞,接种至含氨苄青霉素的LB固体培养基筛选阳性克隆。过夜培养后平板上有2个菌落生长,分别挑取单个菌落摇菌后进行菌落PCR验证,1%琼脂糖凝胶电泳显示只有1个菌落在约2800 bp处出现目的条带,电泳图结果见图3。取菌落PCR阳性菌液继续培养后进行质粒小量提取,将提取质粒进行双酶切验证,1%琼脂糖凝胶电泳显示在2800 bp及7500 bp处分别出现条带,电泳图结果见图4。送菌落PCR及双酶切鉴定均为阳性的克隆质粒到广州艾基生物有限公司进行测序,结果回报显示,重组的pCDH-NOC2L-GFP中的NOC2L序列与GenBank中登记的NOC2L基因100%同源。图4 pCDH-NOC2L-GFP质粒双酶切产物1%琼脂糖凝胶电泳

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3417677