空肠弯曲菌噬菌体的分离鉴定及其初步应用
发布时间：2021-10-07 07:05
空肠弯曲菌是革兰氏阴性微需氧细菌,是引起人类肠道疾病最常见的病原菌之一。近年来,由于抗生素的滥用,空肠弯曲菌对抗生素的耐药性一直在持续增强。世界卫生组织已将空肠弯曲菌列为重要的抗生素耐药细菌,迫切需求新型抗菌制剂。噬菌体是一种细菌病毒,它可以特异性识别并感染宿主细菌,在其体内大量复制,最终裂解杀死宿主菌。与抗生素相比,噬菌体产品具有使用简便、特异性强、增殖迅速、抗菌能力强等许多优点。本研究从鸡粪便和污水样品中分离筛选空肠弯曲菌噬菌体,鉴定噬菌体基础生物学特性和基因组特性。并探索空肠弯曲菌噬菌体最佳应用条件,初步评价噬菌体对空肠弯曲菌的消减效果。一、空肠弯曲菌噬菌体的分离和筛选以空肠弯曲菌NCTC11168为宿主菌,采用双层平板法,从1480份鸡粪便样品和污水样品中检测出244份阳性样品,其中粪便样品阳性率19.69%（189/960）,污水样品阳性率10.58%（55/520）。经过筛选和纯化后,获得45株宽裂解谱空肠弯曲菌噬菌体。不同样品中噬菌体分离率和裂解谱差异明显,粪便样品（19.69%）噬菌体分离率高于污水样品（10.58%）,但污水源噬菌体裂解能力强于粪便源噬菌体;活禽市场鸡...
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：86 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－２噬菌体裂解谱测定??Ｆｉｇ?１－２?Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｐｈａｇｅ?ｌｙｔｉｃ?ｐｒｏｆｉｌｅｓ??
从污水中分离出一株空肠弯曲菌卩蜜菌体，命名为ＣＰ３９?两??株嗟菌体的噬菌斑形态相似，直径约为１－２?ｍｍ，清晰透明，边缘光滑，无晕环。详见图２－??Ｌ』Ｌ?Ｊ??图２－１空肠弯曲菌噬菌体ＣＰ７和ＣＰ３９噬菌斑??Ｆｉｇ?２－１?Ｐｌａｑｕｅｓ?ｏｆ?Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ?ｊｅｊｕｎｉ?ｐｈａｇｅｓ?ＣＰ７?ａｎｄ?ＣＰ３９??３．１嗤菌体效价??菌体ＣＰ７和ＣＰ３９的效价均为１?Ｘ?ｌ〇１Ｑｐｆｕ／ｍｌ，表明两株噬菌体裂解性较好，可以用于??进行后续实验。详见表２－１。??表２－１噬菌体ＣＰ７和ＣＰ３９的效价??Ｔａｂｌｅ?２－１?Ｔｈｅ?ｔｉｔｅｒ?ｏｆ?ｐｈａｇｅｓ?ＣＰ７?ａｎｄ?ＣＰ３９??Ｐｈａｇｅ?Ｔｉｔｅｒ??ＣＰ７?ｌＸ１０１０ｐｆｕ／ｍｌ???ＣＰ３９?ｌＸ１０１０ｐｆｕ／ｍｌ??３．２噬菌体裂解谱??噬菌体ＣＰ７和ＣＰ３９对大肠埃希菌、宋内志贺菌、肠炎沙门氏菌和鸡白痢沙门菌都不??具有裂解能力，表明噬菌体ＣＰ７和ＣＰ３９具有很强的特异性。对９０株空肠弯曲菌分离株的??裂解能力测定结果表明，噬菌体ＣＰ７能裂解４１株空肠弯曲菌（４５．５６％），噬菌体ＣＰ３９能??裂解４８株空肠弯曲菌（５３．３３％），虽然两株噬菌体的裂解率差异不大，但是噬菌体ＣＰ７和??ＣＰ３９裂解谱差异较大，同时也具有一定范围的交叉。详见表２－２。??
Ｔｉｍｅ／ｍｉｎ?Ｔｉｍｅ／ｍｉｎ??图２－３噬菌体ＣＰ７和ＣＰ３９温度耐受曲线??Ｆｉｇ?２－３?Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ?ｏｆ?ｐｈａｇｅ?ＣＰ７?ａｎｄ?ＣＰ３９?ｔｏ?ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ??３．６嗤菌体ｐＨ稳定性??噬菌体ＣＰ７和ＣＰ３９对ｐＨ耐受性较强，在ｐＨ?６－８范围内效价较稳定，ｐＨ值小于６或??大于８都会引起效价的明显下降，但在ｐＨ值为３的强酸和１２的强碱环境中仍具有较高效??价，ｐＨ＜３或＞１２时，基本检测不到噬菌体。详见图２－４。??１勹?、ｍ?＂１??一?２?／?＼?ＣＰ３９??Ｉｓ－?１?＂?＾??Ｉ?＂?１?４．?／??ｕ－??－??６?Ｉ?？?■?ｉ?ｉ?■?ｉ?■?■?ｉ?■?ｉ?■?〇?■?ｉ?？?ｉ?ｉ?Ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?．?１??０?１５?３０?４５?６０?７５?９０?１０５?１２０?１３５?１５０?１６５?１８０?〇?ｊ?２?３?４?５?６?７?８?９?１０?１１?１２?１３?１４??Ｔｉｍｅ／ｍｉｎ?ｐＨ??图２－２噬菌体ＣＰ７和ＣＰ３９的一步生长曲线?图２－４噬菌体ＣＰ７和ＣＰ３９的ｐＨ耐受曲线??Ｆｉｇ?２－２?Ｏｎｅ－ｓｔｅｐ?ｇｒｏｗｔｈ?ｃｕｒｖｅｓ?ｏｆ?ｐｈａｇｅ?ＣＰ７?ａｎｄ?ＣＰ３９?Ｆｉｇ?２－４?Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ?ｏｆ?ｐｈａｇｅ?ＣＰ７?ａｎｄ?ＣＰ３９?ｔｏ?ｐＨ??３．７噬菌体形态鉴定??经透射电镜观察，嗤菌体ＣＰ７和ＣＰ３９均有一正多面体对称头部，头部直径８０?ｎｍ，??有一长约１００ｎｍ、宽１５ｎｍ的尾部
【参考文献】：
期刊论文
[1]空肠/结肠弯曲菌噬菌体分型的研究[J]. 林发榕,王恩泽,王焕妞. 微生物学报. 1986(04)
[2]结肠弯曲菌噬菌体的分离及其特性的研究[J]. 林发榕,王恩泽,郭玉华,张素娟. 江苏医药. 1984(10)
本文编号：3421581
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：86 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－２噬菌体裂解谱测定??Ｆｉｇ?１－２?Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｐｈａｇｅ?ｌｙｔｉｃ?ｐｒｏｆｉｌｅｓ??
从污水中分离出一株空肠弯曲菌卩蜜菌体，命名为ＣＰ３９?两??株嗟菌体的噬菌斑形态相似，直径约为１－２?ｍｍ，清晰透明，边缘光滑，无晕环。详见图２－??Ｌ』Ｌ?Ｊ??图２－１空肠弯曲菌噬菌体ＣＰ７和ＣＰ３９噬菌斑??Ｆｉｇ?２－１?Ｐｌａｑｕｅｓ?ｏｆ?Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ?ｊｅｊｕｎｉ?ｐｈａｇｅｓ?ＣＰ７?ａｎｄ?ＣＰ３９??３．１嗤菌体效价??菌体ＣＰ７和ＣＰ３９的效价均为１?Ｘ?ｌ〇１Ｑｐｆｕ／ｍｌ，表明两株噬菌体裂解性较好，可以用于??进行后续实验。详见表２－１。??表２－１噬菌体ＣＰ７和ＣＰ３９的效价??Ｔａｂｌｅ?２－１?Ｔｈｅ?ｔｉｔｅｒ?ｏｆ?ｐｈａｇｅｓ?ＣＰ７?ａｎｄ?ＣＰ３９??Ｐｈａｇｅ?Ｔｉｔｅｒ??ＣＰ７?ｌＸ１０１０ｐｆｕ／ｍｌ???ＣＰ３９?ｌＸ１０１０ｐｆｕ／ｍｌ??３．２噬菌体裂解谱??噬菌体ＣＰ７和ＣＰ３９对大肠埃希菌、宋内志贺菌、肠炎沙门氏菌和鸡白痢沙门菌都不??具有裂解能力，表明噬菌体ＣＰ７和ＣＰ３９具有很强的特异性。对９０株空肠弯曲菌分离株的??裂解能力测定结果表明，噬菌体ＣＰ７能裂解４１株空肠弯曲菌（４５．５６％），噬菌体ＣＰ３９能??裂解４８株空肠弯曲菌（５３．３３％），虽然两株噬菌体的裂解率差异不大，但是噬菌体ＣＰ７和??ＣＰ３９裂解谱差异较大，同时也具有一定范围的交叉。详见表２－２。??
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【参考文献】：
期刊论文
[1]空肠/结肠弯曲菌噬菌体分型的研究[J]. 林发榕,王恩泽,王焕妞. 微生物学报. 1986(04)
[2]结肠弯曲菌噬菌体的分离及其特性的研究[J]. 林发榕,王恩泽,郭玉华,张素娟. 江苏医药. 1984(10)
本文编号：3421581
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