鼠疫耶尔森氏菌外源获得性质粒编码小RNA的筛

发布时间：2021-10-14 12:58

　　研究背景鼠疫是一种自然疫源性疾病,其病原菌是鼠疫耶尔森氏菌（以下简称鼠疫菌）鼠疫菌共含有3个质粒,即pCD1、pMT1和pPCP1,pCD1质粒为鼠疫菌和假结核耶尔森氏菌所共有,pMT1与pPCP1质粒则是鼠疫菌在进化过程中外源性获得的,为鼠疫菌所特有,与鼠疫菌的致病性密切相关。细菌中除了蛋白类的调控因子之外,还存在许多发挥调控作用的非编码RNA（non-coding RNA）,在细菌中也称作小RNA（small RNA,小 RNA）。小RNA作为调节子,可参与细菌内铁代谢、糖代谢、群体感应、外膜蛋白合成、毒力等生理功能的调控,对原核生物生理和毒力发挥着重要的调节作用。本研究利用高通量测序技术对在不同条件下生长的鼠疫菌提取它的总RNA进行转录组测序,新发现了104个小RNA,其中包括pMT1与pPCP1质粒上的多个小RNA,而这两个质粒又是鼠疫菌在进化过程中获得的,因此验证pMT1与pPCP1质粒上小RNA的功能是鼠疫菌致病机制研究的重要组成部分。本研究旨在利用Northern blot验证新发现的小RNA,并构建小RNA的基因缺失株,通过一系列的表型筛选实验,初步探究了小RNA对鼠疫... 

【文章来源】：安徽大学安徽省 211工程院校

【文章页数】：89 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
本文研究中所用缩略词
前言
    1. 鼠疫菌的危害
    2. 鼠疫菌的生化特征和致病机理
    3. 鼠疫菌和假结核菌的比较
    4. 细菌小RNA的研究
        4.1 细菌小RNA的概念和特征
        4.2 细菌小RNA的分类
        4.3 小RNA与其伴侣分子Hfq
        4.4 细菌小RNA的功能
    5. 鼠疫菌小RNA的研究
    6. 研究目的与意义
    7. 技术路线
第一章 小RNA的鉴定
    1. 引言
    2. 实验材料
        2.1 菌株
        2.2 实验所用试剂
        2.3 实验仪器
        2.4 溶液配制
    3. 实验方法
        3.1 鼠疫菌的培养
        3.2 总RNA的提取
        3.3 体外转录制备小RNA探针
        3.4 Northern Blot实验验证
    4. 结果与分析
        4.1 PCR扩增线性DNA模板
        4.2 地高辛标记的RNA探针的制备
        4.3 总RNA质量检测
        4.4 Northern Blot验证小RNA
        4.5 讨论
第二章 鼠疫菌小RNA突变株的构建
    1. 引言
    2. 实验材料
        2.1 菌株和质粒
        2.2 主要试剂
        2.3 主要仪器与试剂配制
    3. 实验方法
        3.1 小RNA突变株的构建
        3.2 小RNA过表达株的构建
    4. 结果与分析
        4.1 小RNA缺失株的构建
        4.2 小RNA过表达株的构建
        4.3 讨论
第三章 小RNA生理和毒力的研究
    1. 引言
    2 实验材料
        2.1 菌株
        2.2 实验动物
        2.3 主要试剂
        2.4 主要仪器
        2.5 溶液和培养基的配制
    3. 实验方法
        3.1 鼠疫菌小RNA对生物膜形成的影响
        3.2 鼠疫菌小RNA对其生长的影响
        3.3 鼠疫菌小RNA对高盐环境耐受的影响
        3.4 鼠疫菌小RNA对酸性环境耐受的影响
        3.5 小鼠存活实验
    4. 结果与分析
        4.1 小RNA对鼠疫菌生物膜形成的影响
        4.2 小RNA对鼠疫菌在不同生长条件下的影响
        4.3 小RNA对鼠疫菌毒力的影响
        4.4 讨论
参考文献
附录
致谢
硕士期间发表的论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]细菌sRNA对环境胁迫的响应机制[J]. 刘福芮,钟志军,周紫峣,彭广能,杨平,王亚萍,廖莉.  微生物学通报. 2015(10)
[2]地高辛标记的Northern blot检测鼠疫菌sRNA[J]. 邓仲良,苏山春,孟祥荣,吴移谋,杨瑞馥,韩延平.  微生物学报. 2013(03)
[3]病原菌非编码小RNA的致病调控功能研究[J]. 孟霞,王亨,朱国强.  中国预防兽医学报. 2011(09)
[4]鼠疫研究进展与展望[J]. 周冬生,杨瑞馥.  解放军医学杂志. 2010(10)
[5]细菌中的小RNA[J]. 宋兰,周先礼,岳俊杰,梁龙.  生物技术通讯. 2008(04)
[6]利用重组工程技术标记鼠疫菌rpoS基因[J]. 张建山,陈泽良,宋亚军,郭兆彪,王津,王红霞,翟俊辉,杨瑞馥.  中国生物工程杂志. 2006(05)



本文编号：3436202