MDCK悬浮细胞制备及流感病毒敏感性研究

发布时间：2021-10-14 15:42

　　目的建立无血清悬浮培养MDCK细胞的方法,分析其传代、线性放大过程中的稳定性及增殖流感病毒的敏感性。方法运用逐步降血清悬浮驯化法将贴壁培养型MDCK细胞驯化为无血清全悬浮培养型MDCK细胞;进一步分析其生长动力学特性、连续传代稳定性,在5L生物反应器中扩大培养;接种流感和禽流感病毒,测定不同时间HA效价、CCID₅₀滴度,分析其病毒敏感性。结果成功将ATCC引进的贴壁培养型MDCK细胞驯化为无血清全悬浮培养型MDCK细胞（命名为MDCK-XF02细胞）并冻存;不同接种密度培养MDCK-XF02细胞最大增殖密度均达13.0×10⁶ cells/mL以上,且差异无统计学意义（P>0.05）;连续传代培养过程中细胞形态和生长状况稳定,比生长速率差异无统计学意义（P>0.05）;三个代次的MDCK-XF02细胞以2.0×10⁶ cells/mL接种于5 L生物反应器,细胞生长状态良好,倍增时间小于21 h,在批培养中细胞浓度高达（14.57±0.47）×10⁶ cells/mL,比生长速率分别为... 

【文章来源】：中国人兽共患病学报. 2019,35(11)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

驯化前后MDCK细胞形态对比(A:10%FBS,B:1%FBS,C:MDCK-XF02)

血清浓度降到1%适应传代培养两代后(P82、P83代),从P84代传代培养至P98代,共计连续无血清悬浮驯化培养15代。至P96代传代时开始扩大细胞培养量,至P98时细胞总数达2.0×108个以上,消化离心后全用无血清培养基调整细胞密度为3.0×106 cells/mL。至P99代时细胞适应无血清培养,在无血清培养基中悬浮培养活力高、结团少、均一性好,经6次换液后基本适应了悬浮条件下培养,细胞生长速度变快,第9次换液后培养24 h,细胞密度达6.3×106 cells/mL。悬浮培养的MDCK细胞(P99代)第一次传代后以2.0×106 cells/mL接种培养生长速度逐步加快,如图2所示。2.3 MDCK-XF02细胞的冻存、复苏和活力检测结果

倍增时间如图4所示,分别为(18.96±0.35)h、(20.04±0.56)h、(20.25±1.30)h、(22.29±0.30)h、(21.40±0.83)h。不同密度接种培养MDCK-XF02细胞的倍增时间随着接种密度的增大逐渐增加,接种密度高低会直接影响细胞的生长周期,接种密度过高导致细胞快速达到最大增值密度,大量细胞代谢副产物极剧增加,迅速进入衰亡期。接种密度过低会导致培养时间增加,大大增加了生产成本和污染风险。选择合适倍增时间不仅有利于细胞最佳的生长状态也有利于生产实际结合,降低生产成本。图4 不同接种密度培养MDCK-XF02细胞最大增殖密度和倍增时间

【参考文献】：
硕士论文
[1]Marc-145悬浮培养细胞系的建立及培养研究[D]. 马花.西北民族大学 2017



本文编号：3436440